StemSure^® hPSC 培养基Δ

人多能性干细胞无血清培养基

 

　　本产品是无饲养层条件下用于维持培养人ES细胞·iPS细胞的无血清,无动物源性成分的液体培养基。不含BSA及HAS等蛋白，批次间的差别较少，结果稳定。但是，本产品不含bFGF（碱性線成纤维细胞成长因子）。

◆特点

●　无血清、无饲养层培养人 ES· iPS 细胞

●　使用人 iPS 细胞 201B7 细胞系，进行每批次的质量检测

●　不含动物源成分

●　不属于医药用外毒物或剧毒物，保存及处理简单

●　不含蛋白的低蛋白培养基

●　可使用 Matrigel^® 、iMatrix-511、Vitronectin 等培养基质

●　可使用 Accutase, TrypLE Select 等解离液

●　传代培养时添加 Y-27632 可传代培养单细胞

◆检测项目

● 细胞繁殖能力测试（使用人iPS细胞201B7细胞系）

● 碱性磷酸酶染色（使用人iPS细胞201B7细胞系）

● 无菌检测

● pH

● 渗透压

● 内毒素

● 支原体检测

◆使用注意

 

● 本产品不含bFGF（碱性成纤维细胞成长因子）。

● 本产品需冷藏（-20℃）。溶解后无需再冷冻，请保存于２～10℃，并在１周内使用完毕。

 

◆人iPS细胞201B7细胞系

　　将使用Ａ公司培养基（含有 BSA、使用动物源成分）培养的人iPS细胞201B7细胞系移植到 StemSure^® hPSC培养基Δ，进行传代培养。下图为传代移植培养时的细胞形态及细胞集団倍增数、未分化性标记表达结果。

《 细胞形态 》

　　使用 StemSure^® hPSC 培养基Δ培养的人iPS细胞的形态与Ａ公司培养基的几乎相同，没有发生分化，稳定地进行了培养。

《 细胞群倍加数 》

　　对比移植到 StemSure^® hPSC 培养基Δ后的第１代到第５代的细胞，使用 StemSure^® hPSC 培养基Δ的细胞繁殖状况更好。

 ＜ 培养基成分 ＞　
　　StemSure^® hPSC 培养基Δ + 35 ng/ml bFGF

＜ 细胞播种数 ＞　
　　1×10⁵ cells/well（使用６孔培养板）

 

　

《 未分化性标记表达确认 》

　　使用 StemSure^® hPSC 培养基Δ培养至５代，观察到全部的未分化标记物（Nanog, Oct3/4, Tra-1-60, SSEA-4, BC2LCN）。 　

　　　※BC2LCN 是能与存在于人 ES ・iPS 细胞膜表面的糖链特异性结合的重组凝集素。

＜ 培养基成分 ＞　
　　StemSure^® hPSC 培养基Δ + 35 ng/ml bFGF

＜ 细胞播种数 ＞　
　　1×10⁵ cells/well（使用６孔培养板）

 

　

《 未分化性标记表达确认 》

　　使用 StemSure^® hPSC 培养基Δ培养至５代，观察到全部的未分化标记物（Nanog, Oct3/4, Tra-1-60, SSEA-4, BC2LCN）。 　

　　　※BC2LCN 是能与存在于人 ES ・iPS 细胞膜表面的糖链特异性结合的重组凝集素。

＜数据提供　独立行政法人产业技术综合研究所 干细胞工学研究中心 小沼泰子老师、伊藤弓弦老师＞

◆人ES细胞201B7细胞系

　　将使用Ａ公司培养基（含有 BSA、使用动物源成分）培养的人ES细胞201B7细胞系移植到 StemSure^® hPSC 培养基Δ，进行传代培养。下图为传代移植培养时的细胞形态及细胞集団倍增数、未分化性标记表达结果。

《 细胞形态 》

　　使用Ａ公司培养基的细胞，细胞在第２代以后出现了分化。另一方面，使用 StemSure^® hPSC 培养基Δ的细胞，没有发生分化，稳定地进行了培养。

　

《 细胞群倍增数 》

　　比较两者移植到 StemSure^® hPSC 培养基Δ后的第１代到第５代，细胞的繁殖能力没有差异。

＜ 培养基成分 ＞　
　　StemSure^® hPSC培养基Δ + 35 ng/ml bFGF

＜ 细胞播种数 ＞　
　　1×10⁵ cells/well（使用６孔培养板）

 

《 未分化性维持確認 》

　　使用 StemSure® hPSC 培养基Δ培养至第６代，观察到全部的未分化标记物（Nanog, Oct3/4, Tra-1-60, SSEA-4, BC2LCN）。 　　

　　　※BC2LCN 是能与存在于人ES ・iPS细胞膜表面的糖链特异性结合的重组凝集素。

＜数据提供　独立行政法人产业技术综合研究所 干细胞工学研究中心 小沼泰子老师、伊藤 弓弦老师＞

 

 

核型解析

　　对使用 StemSure^® hPSC 培养基Δ培养到第27代的人iPS细胞进行了核型解析，没有发现染色体异常。　

＜数据提供　　独立行政法人国立成育医疗研究中心研究所 再生医疗中心 三浦巧老师、阿久津英憲老师＞

 

 

人iPS细胞201B7分化成三胚层

　　使用 StemSure^® hPSC 培养基Δ将人iPS细胞201B7细胞系培养至第３代，再使用 StemSure^® 系列培养基进行驯化培养，可观察到 βⅢ-Tubulin、α-SMA、AFP，因此判断细胞形成胚体后，进行了三胚层分化。

＜ 培养基成分 ＞
　　StemSure^® D-MEM + StemSure^® Serum Replacement + 2 mmol/l L-Glutamine + 10 mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoetanol + 1 x Non-essential Amino Acids Solution