topogen TG2000H-2现货说明书

人拓扑异构酶IIα酶–500单位

Human Topoisomerase IIα Enzyme – 500 Units

Human Topoisomerase IIα Enzyme

纯化的人拓扑异构酶IIα（Top2a）过表达，并在SDS-PAGE上纯化至单一条带的均一性。拓扑异构酶II高度纯化，无核酸酶污染。

人拓扑异构酶IIα质量控制试验

核酸污染：通过检测线性kDNA和线性质粒DNA的形成来检测。在37°C（在top2a测定条件下，含或不含ATP）下，将1µg连环KDNA或超螺旋pUC19 DNA孵育4小时。

通过在抑制人类topo IIa活性的条件下测定超螺旋DNA的松弛来评估与topo I的交叉污染。将过量纯化的酶与pRYG DNA在37°C条件下，在不存在ATP（含或不含Mg++）的情况下孵育2小时。在这些条件下，不得检测到pRYG超螺旋DNA的松弛。

当SDS-PAGE凝胶过载纯蛋白时，可以看到170kDa的主带。最终馏分中没有180kDa拓朴II形式。（不同批次的蛋白质浓度不同，但通常在5-50μg/ml的范围内）人类拓扑异构酶IIα的供应量为2-10单位/ul（37°C时，1个单位将在30分钟内降解0.2μg KDNA）。注意，单位定义基于优选的DNA底物kDNA（动粒DNA）。我们建议将kDNA底物与这种酶一起使用，因为质粒DNA弛豫测定几乎不那么敏感。活性基于kDNA脱链（而非质粒DNA松弛）进行验证。

top2酶的最终部分来自FPLC柱，在以下缓冲液中：10%甘油、50mM Tris（pH 7.7）、1mM EDTA和EGTA、650mM NaCl。

人拓扑异构酶IIα测定条件和性能质控

使用在拓扑II反应缓冲液（50mM Tris-Cl，pH 8.0，120mM KCl，10mM MgCl2，0.5mM ATP，0.5mM二硫苏糖醇）中最终体积为20-30µl的动载体DNA（KDNA）底物和0.2µg KDNA进行链连接测定。用5µl（每20µl反应体积）的终止缓冲液（5%沙科西、0.0025%溴酚蓝、25%甘油）终止反应。反应产物在含有0.5ug/ml溴化乙锭的1%琼脂糖凝胶上分析。当凝胶运行时，用手持紫外光源可以容易地监测2.5kb DNA微环脱链产物的分辨率。

酶在干冰上运输，应在-70°C下储存。我们还建议在第一次解冻后等分酶（反复冷冻/解冻会导致活性丧失）；酶活性稳定1-2天（不更长）。