Lactadherin是一种分布广泛的糖蛋白（〜50 kDa），最初由于与乳脂/脂质小球膜相关而被表征。同义词是PAS-6 / 7，牛相关黏蛋白，BA-46，P47和MFG-E8。内分泌粘附素的结构特征是存在两个表皮生长因子（EGF）同源域（在第二个EGF域中具有RGD肽基序），以及两个与凝集素域的盘状蛋白家族具有同源性的C域，包括凝血因子V和VIII。乳杆菌粘附素以钙非依赖性方式显示优先结合磷脂酰丝氨酸（L-形式），并且比膜联蛋白V更特异性地结合。

纯化的乳黏附素通过阻断血液凝固蛋白的含磷脂酰丝氨酸的膜位点而起抗凝剂的作用（10）。荧光标记的乳黏附素用作有核细胞和受刺激的血小板上暴露的磷脂酰丝氨酸的敏感探针（8、9）。乳粘附素将与磷脂酰丝氨酸含量低于膜联蛋白V结合阈值的膜结合。

内酯粘附素是从未经巴氏消毒的牛乳中提纯的（11）。

图解应用

上图： K562细胞（上）和HL60细胞（下）在凋亡早期与FITC结合的乳黏附素（绿色）和Alexa-647结合的膜联蛋白V（红色）共同染色。膜联蛋白被内化在颗粒中，并且未检测到染色细胞。参考：Shi，J.，Y. Shi，LN Waehrens，JT Rasmussen，CW Heegaard和GE Gilbert（2006）。“乳粘附素检测到永生化白血病细胞经历程序性细胞死亡的早期磷脂酰丝氨酸暴露。” 细胞计数法A 69（12）：1193-201。版权所有2006。JohnWiley＆Sons，Inc.经John Wiley＆Sons，Inc.许可转载。

上图：用星形孢菌素处理后2小时（上）和3小时（下），用FITC结合的乳黏附素染色的HeLa细胞。在细胞凋亡的早期，细胞具有小囊泡和长而细的附肢，可被乳黏附素染色。参考：Waehrens LN，Heeghaard，CW，Gilbert GE，Rasmussen JT。牛Lactadherin作为在凋亡HeLa细胞表面表达的磷脂酰丝氨酸的钙独立成像剂2009 J. Histochem。细胞化学。（2009年6月，ePub）。

以上：小鼠肠系膜静脉血栓形成中的磷脂酰丝氨酸暴露。在即将肠系膜外在化之前，通过尾静脉向小鼠分别给予1μg乳黏附素和膜联蛋白V。肠系膜暴露于氯化铁中，然后用盐水/多聚甲醛灌注动物。用抗血纤蛋白原/血纤蛋白（左），抗血小板（中）和用碱性磷酸酶Vector Red底物显影的抗漆蛋白抗体（右）对肠系膜的连续部分进行染色。一层纤维蛋白原/纤维蛋白（左，实心箭头）覆盖了壁画出血（空心星）。血小板（中部）沿血栓的腔表面（空心三角形）散布，并在纤维蛋白原/纤维蛋白链延伸进入内腔时散布。乳腺粘附素染色（右）在升高的内皮表面上*（实心箭头），包括靠近壁的粘附血小板。纤维蛋白链上的血小板未检测到染色（空心箭头）。（Shi J，Piper SW，Rasmussen JT，Heegaard CW，Gilbert GE。乳杆菌粘附素在体内阻断血栓形成和止血：与血小板磷脂酰丝氨酸的暴露相关。JThrombHaemost。2008年7月； 6（7）：1167-1174）。

使用BLAC-FITC的准则：

FITC偶联的牛乳粘附素（BLAC-FITC）作为100X储备溶液（1.6微摩尔）在20mM Tris，150mM NaCl，pH 7.4的缓冲液中提供，缓冲液中含1％（w / v）牛血清白蛋白和0.02％叠氮化纳。假设大多数标记反应体积约为0.5ml，则一小瓶100X储备材料足以进行200次标记反应。  此外，由于该产品带有荧光标记，因此应避光。

对于典型的细胞染色实验，通过离心收集凋亡细胞，然后重悬在生理缓冲液中，例如TBS（20mM Tris，150mM NaCl，pH 7.4），HBS（20mM Hepes，150mM NaCl，pH 7.4）或PBS（4.3mM Na 2 HPO 4，1.47mM KH 2 PO 4，137毫米的NaCl，2.7mM的KCl，pH 7.4）中，以大约1×10的最终细胞计数6细胞/毫升。可以通过胰蛋白酶消化收获粘附细胞，但是在将最终悬浮液制成缓冲液之前，应在培养基或缓冲液中至少洗涤一次。以每0.5ml细胞悬液5微升的速率将100X FITC共轭乳胶粘附原液添加到细胞悬液中。此时，可以通过添加PI至终浓度为0.5至1 µg / ml来开始进行碘化丙啶（PI）的可选染色。将反应混合物在室温下（避光）孵育5至10分钟。

标记的细胞可以通过多种方法进行分析，包括流式细胞术和荧光显微镜检查。可以使用以下检测器设置监视荧光检测：

            BLAC-FITC：Ex = 488 nm；Em = 530海里

            PI：Ex = 488 nm；Em = 640纳米