Favorgen FABGK100说明书
Favorgen位于中国台湾国家生物技术园区。它通过自动化系统建立了ISO合格工厂，
生产高质量的分子生物学产品和临床化学试剂。目前，Favorgen在美国，中国，韩国和丹麦设立分支机构，并在30多个国家设立了分销网络。自成立以来，Favorgen已经在其先进的生产设施上投入了大量资金，以竞争力的价格为客户提供高质量的产品。Favorgen致力于通过与学术和行业合作伙伴的内部和合作开展研究，以不断提供高质量的创新产品。
Favorgen FABGK100说明书
Nucleic-acids extraction Genomic DNA Extraction
核酸提取基因组DNA提取
Genomic DNA Extraction Blood DNA Mini / Midi / Maxi Kit
FavorPrep Genomic DNA Mini Kit (Blood/Cultured Cell)
Cat. No.:
FABGK 100 (100 Preps)
FABGK 300 (300 Preps)
RBC Lysis Buffer 135 ml 405 ml
FATG Buffer 30 ml 75 ml
FABG Buffer 40 ml 100 ml
W1 Buffer 45 ml 130 ml
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Wash Buffer* Elution Buffer |
(concentrated) |
25 ml 30 ml |
50 ml 75 ml |
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FABG Column |
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100 pcs |
300 pcs |
2 ml Collection Tube 200 pcs 600 pcs
次打开时，加入100 ml/200 ml乙醇(96%~100%)到洗涤缓冲液中。
规格
样本量：全血高达300μl
冻血可达200μl，布瓦毛可达200μl
培养的动物细胞多可达1×10 7
培养的细菌细胞多可达1×109，真菌细胞可达5×107。
平均产量：约50μg格式：自旋柱
处理时间：60分钟内
重要事项
本系统中提供的缓冲区包含刺激物。在处理这些缓冲器时，戴上手套和实验室外套。
为了猫。没有。FABGK 100，次打开时加入100 ml乙醇(96~100%)洗涤缓冲液。为了猫。没有。FABGK 300，加入200毫升乙醇(96~100%)，次打开时加入洗涤缓冲液。
在试管中加入200μ1的FATG缓冲液，再用旋涡或圆孔法重新悬浮细胞球团。
在室温下孵育5分钟，然后从第2步(细胞溶解)开始遵循培养的细胞协议。
发现并修理故障，解决纷争:
低产量
使用了太多的细胞
-减少样本量。
蛋白酶K活性不足导致细胞溶解不良
-使用新鲜或保存良好的蛋白酶K库存溶液。
由于与FABG缓冲液混合不足，细胞溶解能力差
-用脉冲涡旋法将样品和光纤光栅缓冲液立即*混合。
细胞溶解能力差，原因是培养时间不足
-延长孵化时间，确保没有残留的微粒。
在转入fbg midi柱之前，未将乙醇加入裂解液中。
当次打开时，乙醇不会加入到洗涤缓冲液中；在加入洗涤缓冲液之前，乙醇的体积或百分比是不正确的。
基因组DNA的洗脱是无效的
-确保ddH2O的pH值在7.5-8.5之间。
-加入萃取缓冲液或ddH2O后，在离心前将FABG MIDI柱放置5~10 min。
血样中含有血疙瘩
-将血样与抗凝血剂混合，防止血栓形成。
样品太粘稠
-减少样本量。
纯化的dna在下游应用中表现不佳。
样品是旧的
-总要使用新鲜或保存完好的样本提取基因组DNA。
乙醇残留污染
–在洗涤步骤之后，在4000xg下离心10分钟以干燥FabgMIDI柱。
RNA污染
特别协议：(针对细菌)步骤1-样品准备
革兰阴性菌：
将适当数量的细菌细胞(多可达1×10 9)转移到1.5ml微离心管(未提供)并全速离心
(14，000 rpm或10，000 x g)1分钟。然后丢弃上清液。
加入2 0 0μ1的FATG缓冲液，再用旋涡或管状再悬浮球团。室温下孵育5分钟。
从第二步开始遵循培养的细胞协议(细胞溶解)。
革兰阳性细菌：
将适当数量的细菌细胞(多可达1×10 9)转移到1.5ml微离心管(未提供)并全速离心
(14，000 rpm或10，000 x g)1分钟。然后丢弃上清液。
加入200μ1的溶菌酶缓冲液(20 mg/ml溶菌酶；20 mm Tris-HCl；2 mm EDTA；1%TritonX-100，pH 8.0；制备新鲜溶菌酶缓冲液)。
在使用前)，再用旋涡或管道将球团重新悬浮。
室温下孵育10分钟。在孵化过程中，每2-3分钟倒置一次.
从第二步开始遵循培养的细胞协议(细胞溶解)。
特别议定书：(用于真菌)
步骤1-样品准备
收集适当数量的真菌细胞(多5×10 7)至1.5ml微离心管(未提供)，离心机为5 000 x g
10分钟。然后丢弃上清液。
加入6 0 0μ1的山梨醇缓冲液(1.2 M山梨醇；10 mm CaCl 2；
0.1mTris-HCl，pH7.5；35 mm-巯基乙醇)，并重新悬浮颗粒。
添加200 U的裂解酶或酶解酶。在30℃时孵育30分钟。
将混合物在2，000 x克离心10分钟，取出球体，然后移除上清液。
一般性议定书：
在开始以下步骤之前，请阅读重要说明。
第1步-红细胞溶解
在抗凝治疗收集管中收集新鲜人血。
将300μl新鲜血液转移到1.5ml微离心管(未提供)。如果样品超过300μl(可达1毫升)，将样品加入无菌15毫升离心管。
加入3倍红细胞溶解缓冲液样品体积，倒置混合。不要漩涡。
室温下孵育10分钟。
3，000 x g离心5分钟，*取出上清液。
用1 0 0μ1的红细胞裂解缓冲液复苏球团。
步骤2-细胞溶解
加入200μl的光纤光栅缓冲器，并通过涡流混合。
在室温下孵育10分钟，或直到样品溶解液清澈为止。在孵化过程中，每隔3分钟倒置一次管子。
预热需要70℃水浴中的排出缓冲液(步骤5)。
(可选步骤)：如果需要无RNA的基因组DNA，在样品中加入5μl 10 mg/mlRNase A，然后用涡流混合。在室温下孵育5分钟。
步骤3-绑定
在样品中加入200μl乙醇(96%~100%)，搅拌10秒。(如果有任何沉淀物，就会喷出。)
将FABG柱放置到2ml收集管上。将样品混合物(包括任何沉淀物)仔细转移到FABG柱。离心机
全速5分钟(14，000转或10，000克)并丢弃2毫升收集管。将FABG列放置在一个新的2ml收集管中。
(适用于新鲜血液)
特别议定书：(用于培养细胞)
步骤1-样品准备
培养动物细胞：
在收获前使贴壁细胞变小。
将适当数量的细胞(至多1×10 7)转移到1.5ml微离心管(未提供)，并以6 000 x g离心20秒。
取上清，用150μ1红细胞溶解缓冲液重新悬浮。然后按照步骤2(细胞溶解)。
新鲜血液(人血除外)：
哺乳动物血液的样本体积(无核)可以是
有核红细胞(如鸟类或鱼类)的样品体积可达10μl。
将150μ1的FATG缓冲液和血样放入1.5ml微离心管(未提供)。按旋涡混合，然后按照步骤2(细胞溶解)进行。
步骤2-细胞溶解
加入200μl的光纤光栅缓冲器到样品和漩涡5秒。
在70℃下孵育10分钟，或直到样品溶解液清澈为止。在孵化过程中，每隔3分钟倒置一次管子。
预热需要70℃水浴中的排出缓冲液(步骤5)。
(可选步骤)：如果需要无RNA的基因组dna，添加5μl
RNase A浓度为10 mg/ml，用旋涡混合。在室温下孵育5分钟。
从步骤3(绑定)开始遵循“一般协议”。
步骤4-绑定
在样品中加入250μl乙醇(96%~100%)，搅拌10秒。(如果有任何沉淀物，就会喷出。)
将FABG柱放置到2ml收集管上。将样品混合物(包括任何沉淀物)转移到FABG柱。离心机5分钟
全速(每分钟14，000转或10，000克)并丢弃2毫升的收集管。将FABG列放置在一个新的2ml收集管中。
步骤5-清洗
用400μl W1缓冲液清洗光纤光栅柱。离心机1分钟
全速(14，000转或10，000 x克)并丢弃流过.
将FABG柱放回2ml收集管中。用600μl洗涤缓冲液(添加乙醇)清洗光纤光栅柱。全速离心1分钟(每分钟14，000转或10，000克)，并丢弃流动节流阀。 Ghana 加纳.
-确保乙醇在次打开时加入到洗涤缓冲液中。
将FABG柱放回2ml收集管中。离心机
全速增加3分钟(14，000转或10，000克)干燥柱。
-重要的一步！这一步将避免残留的液体来抑制后续的酶促反应。
步骤6-释放
将干燥的FABG柱放置在新的1.5ml微离心管上。
将预热排液缓冲液或TE的100μ1加入到FABG柱膜中心。
-重要的一步！若要进行有效洗脱，请确保洗脱液为
分散在膜中心，*吸收。
将FAGB栏在37 C处孵育10分钟。
全速离心1分钟(14，000转或10，000克)，以躲避DNA。
-标准洗脱体积为100μl。如果需要更高的dna产量，重复dna。
洗脱步骤可提高DNA的回收率，总体积可达2 0 0μ1。
步骤终-纯dna
将DNA片段存储在4℃或-20℃
第4步-清洗
用400μl W1缓冲液清洗光纤光栅柱。离心30秒
全速(14，000转或10，000 x克)并丢弃流过.
将FABG柱放回2ml收集管中。用600μl洗涤缓冲液(添加乙醇)清洗光纤光栅柱。全速离心30秒(每分钟14，000转或10，000克)，然后丢弃- 通过，穿过.
-确保乙醇在次打开时加入到洗涤缓冲液中。
将FABG柱放回2ml收集管中。离心机
全速增加3分钟(14，000转或10，000克)干燥柱。
-重要的一步！这一步将避免残留的液体来抑制后续的酶促反应。
第5步-逃避
将干燥的FABG柱放置在新的1.5ml微离心管上。
特别议定书：(适用于冰冻血液)
步骤1-样品准备
将多达200μl的血液转移到1.5ml微离心管(未提供)。如果样本容量小于200μl，则添加适当的pbs卷。
在样品中加入30μl蛋白酶K(10 mg/ml)，并进行简单混合。然后在60℃孵育15分钟。
步骤2-细胞溶解
加入200μl光纤光栅缓冲器到样品中，用涡流混合。
在70℃水浴中孵育15分钟，将样品溶解。在孵化过程中，每3分钟倒置一次样品。
预热需要70℃水浴中的排出缓冲液(步骤5)。
(可选步骤)：如果需要无RNA的基因组DNA，在样品中加入5μl 10 mg/mlRNase A，然后用涡流混合。在室温下孵育5分钟。
从步骤3(绑定)开始遵循“一般协议”。
特别议定书：(为Buffy Coat)
步骤1-样品准备
将全血在3，300 xg下离心10分钟，在室温下可得到三个不同的组分：上清层为血浆；
中间层是布菲膜，含有浓缩的白细胞；底层是浓缩的红细胞。从布菲皮毛中提取总dna将产生比dna高出5-10倍的DNA。 一个等价
全血的体积。
第2步-红细胞溶解
将多达200μl的布菲大衣转移到1.5ml的微离心管中(未提供)。
加入3倍红细胞溶解缓冲液样品体积，倒置混合。
室温下孵育10分钟。在孵化过程中，每隔3分钟倒置一次管子。
全速离心1分钟(14，000转或10，000克)，*除去上清液。
用5 0 0μ1的红细胞裂解缓冲液对球团进行复苏。然后以全速离心1分钟(14，000转或10，000克)，*除去上清液。
用红细胞裂解缓冲液2 0 0μl复苏球团。(仅用旋涡将管子混合。确保球团*重新挂起，否则在处理绑定步骤时将阻止列)。
步骤3-细胞溶解
在样品中加入250μ1的光纤光栅缓冲液，通过涡流混合。
在室温下孵育30分钟，或直到样品溶解液清澈为止。在孵化过程中，每隔3分钟倒置一次管子。
预热需要70℃水浴中的排出缓冲液(步骤6)。
(可选步骤)：如果需要无RNA的基因组DNA，在样品中加入5μl 10 mg/mlRNase A，然后用涡流混合。在室温下孵育5分钟。
基因组DNA提取血液DNA Mini / Midi / Maxi试剂盒
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FABGK 000 |
FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取迷你试剂盒 |
4个准备。 |
蛋白酶K粉末 |
在室温（15~25℃）下保存2年。 |
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FABGK 001 |
50个准备。 |
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FABGK 001-1 |
100个准备。 |
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FABGK 001-2 |
300个准备。 |
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FABGK 100 |
FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取迷你试剂盒 |
100个准备。 |
RBC裂解缓冲液 FATL缓冲液 FABG缓冲液 W1缓冲液 洗涤缓冲液（浓） 洗脱缓冲液FABG迷你柱 2ml收集管
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在室温（15~25℃）下保存2年。 |
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FABGK 300 |
300个准备。 |
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FABGK 002-S |
FavorPrep血液/培养细胞基因组DNA提取Midi试剂盒 |
2个准备。 |
蛋白酶K粉末 |
在室温（15~25℃）下保存2年。 除蛋白酶K粉外，贮存于4℃。 |
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FABGK 002 |
20个准备。 |
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FABGK000-MAXI |
FavorPrep™血液/培养细胞基因组DNA提取Maxi试剂盒 |
2个准备。 |
Proteinase K Powder |
在室温（15~25℃）下保存2年。 |
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