Immunetics DK-B502-032说明书

Bactx®血小板细菌检测试剂盒
产品目录号：DK-B502-032
32个测试
预期用途：
用于检测血小板中细菌的Immunetics®Bactx®细菌检测试剂盒是一种快速、定性比色法，用于检测高达六（6）单位白细胞池中的需氧和厌氧革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。
输血后四（4）小时内汇集的全血源性血小板（血小板减少，白细胞减少）减少作为质量控制试验。
简介：
细菌是血小板单位中常见的污染传染源。据估计，单采血小板捐献的细菌污染率为1/5000，使血小板成为输血相关感染的常见来源。
一
. 因为血小板必须储存在20-24
为了维持功能，少量的细菌
大部分是从捐献者的皮肤中引入血小板，在几天内可以增加到非常高的数量。
二
. 皮肤菌群
并不是污染血小板单位的仅有的细菌来源；许多革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的菌株已在被污染的血小板单位中被鉴定出来，包括葡萄球菌、假单胞菌、芽孢杆菌和链球菌。
三
. 为了提高输血安全性，AABB于2004年3月发布了指令5.1.5.1，要求血库和输血服务机构对所有血小板单位实施细菌检测方法。
四
. 随着AABB临时指令5.1.5.1.1的实施，进一步的保障措施于2011年1月生效，该指令规定，此类细菌检测方法必须在FDA批准之前进行，或必须证明对FDA批准的方法具有同等的敏感性。
五
.
Bactx®试剂盒是一种定性比色分析法，通过识别肽聚糖（细菌细胞壁中普遍存在的成分）检测血小板样品中的细菌。该试剂盒由冻干肽聚糖检测试剂、样品制备试剂、对照品和微胶管组成。在肽聚糖存在下，该分析产生红色。
表明血小板样本中存在细菌的产品。用光度计对反应产物进行检测，并用基于PC的软件对结果进行自动解释。原理：Bactx®检测检测白细胞减少全血源性血小板（LR WBDPS）池中的细菌。Bactx®检测可识别革兰氏阳性、革兰氏阴性、需氧和厌氧细菌。本试验检测是否存在肽聚糖（pg），肽聚糖是革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中细菌细胞壁的组成部分。
为了测试汇集的血小板是否存在细菌性PG，从血小板袋中进行小体积血小板（0.5 ml）的空间取样，并将其添加到含有1 ml溶解试剂的微胶管中，并通过倒置进行混合。将微胶管短暂离心成不溶性血小板碎片和细菌细胞壁碎片（如果存在）。然后将颗粒均匀化。
在0.5毫升的提取试剂中，用移液管上下移动10次。碱性提取试剂能有效地从细菌细胞壁释放PG，达到良检测效果。后，将0.5毫升的悬浮液加入含有0.5毫升中和试剂的清洁的微滤管中，倒置混合。
从所得样品中，将0.3 ml添加到含有冻干检测试剂的试管中，将试管旋转3秒钟，然后将试管放入Bactx®阅读器中。Bactx®读卡器是一种光度计，可自动监测检测反应，并使用安装在所提供笔记本电脑上的软件解释结果。如果在
在30分钟的读取时间内，将生成一个“失败”结果并伴有声音警报；否则，将记录一个“通过”结果。
Bactx®套件和相关协议包含在美国专有技术7598054和其他未决专有技术中。

供应材料：
1。Bactx®反应管（零件号：CB-B005-032）。32个密封玻璃管，每个管含有用于1次试验的冻干检测试剂。
2。溶解试剂（部分CC-L001-060）。含有氢氧化钠、表面活性剂和正丁醇的水溶液，1 x 60毫升。
三。提取试剂（零件号CC-E001-060）。氢氧化钠水溶液，1 x 60 ml。
4。中和试剂（零件号CC-N001-060）。4加入庆大霉素的吗啉丙烷磺酸盐（MOPS）溶液
作为防腐剂，1 x 60 ml。
5。阳性对照（部分CB-P012-000）。从悬浮在MOPS缓冲液中的枯草芽孢杆菌提取纯化肽聚糖，添加庆大霉素作为防腐剂，1 x 1.8 ml。
6。阴性对照（部分CB-N031-000）。添加庆大霉素作为防腐剂的MOPS缓冲液，1 x 1.8 ml。
7。无菌2毫升微型离心管（微型离心管）（零件号AA-T029-000），数量50。
8。无菌1.5毫升微型离心管（零件号AA-T032-000），数量50。

所需但未提供的设备：
1。台式微型离心机（可旋转14000–20000 x g）（示例包括Eppendorf 5418和5424型、Beckman Coulter Microfluge 18和Thermo Scientific Sorvall Legend Micro 21）。
2。用于1.5–2毫升微型胶管的机架。
三。旋涡练习。第2页共13页生效日期：2012年6月8日CF-B502-704
4。校准单通道1000L微量移液器。
5。无菌一次性1000L移液管（宜带过滤器）。
6。清洁的一次性液体废物容器（例如50毫升锥形管或无菌样品杯）。
7。带盖子的无菌容器，用于在制备样品（微滤片或离心管）之前接收初始血小板样品。
8。无菌取样装置或脱管器、封管器、干净的刀口（剪刀、手术刀或分段取样装置）。
一次性使用酒备垫。
9。BACTX
畗读卡器（非调音部分BTX-001）。
10。笔记本电脑，配备Bactx®分析软件（非调节剂部分AA-C018-000）。
11。个人防护设备（包括安全眼镜）。
12。用于清洁BACTX上管槽的罐装压缩空气
必要时读取。有关指南，请参阅Bactx Reader®用户手册（Immunitics Doc GN-U0001）。
13。必要时，清洁塑料镊子，以清除管槽中的碎屑。有关指南，请参阅Bactx Reader®用户手册（Immunitics Doc GN-U0001）。

警告：
1。用于体外诊断。
2。处理工具箱组件时，应始终使用丁月青手套（尽量不要使用粉末）。不应戴乳胶手套，因为乳胶微粒可能导致错误的结果。
三。为了使试验达到适宜、可重复和准确的性能，技术人员应接受有关程序的培训，并且必须遵守本说明书中的所有说明。偏离指示可能导致错误结果。
4。在bactx®分析中使用的所有样品和材料应在生物危害废物容器中处理。按照OSHA血源性病原体标准（29 CFR 1910-1930）处理所有含血小板的溶液。
5。在进行分析时，穿戴适当的个人防护装备，包括安全眼镜。
6。使用后要盖紧瓶盖，避免污染。
7。所有步骤的室温应在19-26°C之间。
8。在分析过程中保持Bactx®读卡器盖打开。在分析过程中，不要从Bactx®读卡器中取出试管。
9。不要使用过期的试剂。一旦打开，Bactx®细菌检测试剂盒可使用21天。
10。BACTX®反应管含有人血清白蛋白。没有已知的检测方法能够*保证从人类来源获得的产品不会传播感染。因此，所有人工来源的材料都应被视为具有潜在传染性。建议使用BACTX
反应管的处理应符合OSHA关于血源性病原体的标准，并采取普遍预防措施。
6在BACTX®反应管中含有的人血清白蛋白在FDA批准的中心被发现对人类免疫缺陷病毒1型和2型（HIV1/HIV-2）、HIV-1抗原（HIV-1 Ag）、丙型肝炎病毒（HCV）和乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的抗体无反应性。
11。阳性对照品含有来源于灭活微生物的成分。没有一种已知的检测方法能够*保证从灭活微生物中获得的产品不会传播感染。生物安全2级或其他适当的生物安全做法应用于含有或怀疑含有传染源的材料。
12。Bactx®细菌检测试剂盒的性能特点是使用混合的、白细胞减少的全血衍生血小板和CP2D抗凝剂。
13。用户应根据科学合理的取样方法验证Bactx®分析系统。
限制：
1。合并白细胞减少的全血源性血小板样本应在从池中取出后2小时内进行检测。
2。推荐的72小时宜采样时间仅基于8种需氧生物的检测。在检测研究中，被测厌氧生物没有生长。查阅性能章节
特性，见下文。
三。待测血小板应在采集后8小时内制备，并悬浮于血浆中。
4。为了获得适宜性能，白细胞减少应在处理（预储存）时进行。在Bactx®之前进行后续过滤的池
取样可将白细胞减少血小板池中的细菌负荷降低到低于Bactx®检测限的水平。

试剂注意事项：
根据OSHA 29 CFU 1910.1200和适用的欧洲共同体（EC）指令对试剂进行分类。
适用的分类、风险（R）和安全（S）术语如下所示。如有要求，可提供材料安全数据表。

储存和稳定性：
•将Bactx®反应管、萃取剂、对照品和中和剂储存在2–8°C。
•在2–26°C下储存分析试剂和微胶管。
•在试剂盒标签上注明失效日期之前，使用Bactx®反应管、溶解试剂、提取试剂、阳性对照品、阴性对照品和中和试剂。一旦打开，Bactx®细菌检测试剂盒可使用21天。
推荐技术：
正确清洁工作区域：
只要使用仔细的实验室技术，并定期进行清洁，以防止污染物进入试验试剂中，就可以在工作台上进行该试验：
•清洁表面，用消毒剂（70%酒精喷雾或类似物）和干净的纸巾进行日常试验，作为良好的实验室做法。理想情况下，在进行每项试验之前，应进行消毒。
•应定期清洁样品制备所需的微量移液器、微型管架、涡流器和离心机，以避免样品受到污染。
•工作区应为无通风区，行人流量低。
正确处理样品：
•搬运工具箱组件时，应始终使用丁月青手套（尽量不含粉末）。不应戴乳胶手套，因为乳胶微粒可能导致错误的结果。
•避免接触管和盖的顶部，因为这可能会引入污染物。
•应经常更换手套，以避免样品受到污染。
•保持所有管道关闭，必要时仅短暂打开。这将防止空气或其他表面的污染。
•在样品制备过程中，仅使用随Bactx®试剂盒提供的1.5 ml和2.0 ml微胶管。
样品类型：
1。为了获得宜性能，从收集LR-WBDP池中新单元后72小时到第5天结束时存储旧单元的池中抽取样本。
2。血小板应从储存在20-24℃平台振动筛上的装置中取样。

样品采集：
对于要测试的每个血小板池：
1。在无菌收集管（微型胶卷或带帽离心管）上用细尖长久性墨水实验室标记笔写下池ID。
2。确认收集管上的ID与池上的ID相同。
三。使用以下两种方法之一将至少0.5 ml血小板转移到无菌收集管中：
•要使用经批准的无菌连接设备，请参阅设备制造商的说明。第4页共13页生效日期：2012年6月8日CF-B502-704
•从新创建的段中取样：
a.使用管剥离装置将段中存在的血小板表达回血小板单元。
b.在不释放剥离装置的情况下，将血小板单元翻转几次。
c.松开剥离装置，让血小板流入空段。
d.使用管道密封装置密封长度为4–6”的管段（遵循制造商关于正确使用管道密封装置的说明）。
e.分离管段。
f.将血小板转移到无菌收集管中：
F1。用无菌酒备垫清洁管段的一端。
F2。将段的干净端直接放在样本收集容器上。
F3。用干净的刀口（剪刀、手术刀或切片取样装置）切开切片末端，并将血小板排入收集管。
F4。为了增加血小板在节段中的流速，从封闭端挤压节段并将样品推向开口或切开节段的封闭端。
F5。将盖子放在收集管上。
F6。废弃空的段和段取样装置（如果使用）作为生物危险废物。
F7。用无菌酒备垫清洁剪刀或手术刀。
4。收集的血小板样本应在从血小板单元取出后2小时内进行处理。
5。重复步骤1-4，多八（8）个血小板池。

试验程序：
开始测试前执行以下步骤：
•从冰箱中取出Bactx®反应管、裂解试剂、萃取试剂和中和试剂。使用前，将这些试剂保持在室温（19–26°C）下45分钟。
•按照Bactx®读卡器用户手册（文件GN-U0001）中提供的说明打开Bactx®读卡器并打开Bactx®分析软件程序。在Bactx®程序窗口中，所有八个频道都应显示“准备就绪”。应将技术人员的ID（2-40个字符）输入到Bactx®软件窗口顶部的“Technician ID”字段中。
控制：
控制应每班运行一次，或根据实验室的质量控制政策。每次校准Bactx®读卡器后也应运行控制装置。此校准程序在BACTX中描述
读者手册（文件GN-U0001）。每个实验室负责使用BACTX®控制来确定可接受的质量。
在特定实验室环境和使用条件下监测试验性能的保证计划。控制溶液直接添加到Bactx®反应管中。阳性对照品在使用前必须*旋转，以*重新悬浮肽聚糖溶液。
1。要运行控制，首先以大速度旋转正控制管4次，持续30秒。负控制管在使用前只需要脉冲涡流。
2。使用一个精细的长久性实验室标记，通过在Bactx®反应管标签上打印的“ID”空白上书写，将两个Bactx®反应管为正和负。
三。通过将脱盖器的带刺端插入盖的内唇下，从每个BACTX®反应管上拆下绿色盖。轻轻地转动去盖器以拆下盖。将绿色盖弃置在适当的废物容器中。
4。使用校准的单通道1000L微量移液器，将0.3ml阳性和阴性对照品转移到相应的Bactx®反应管中。
5。以大速度旋转每个Bactx®反应管3秒钟以混合。
6。立即将Bactx®反应管放入Bactx®读卡器。确保反应管的底部与Bactx®读卡器中的井底部接触。更换BACTX®读卡器的盖子。
7。在笔记本电脑上的Bactx®分析窗口中，单击“Start all samples”（开始所有样本）按钮。测试将运行30分钟。按照Bactx®读卡器用户手册中的说明保存分析结果。
8。在30分钟分析结束时，Bactx®分析软件应报告阴性对照管“通过”和阳性对照管“失败”的结果。如果控制结果不符合质量保证验收标准，请联系非协调人。在没有令人满意的控制性能的情况下，不要开始血小板池测试。

Bactx®样品的制备：
标记微胶管和Bactx®反应管：
本节介绍了微胶管和反应管的正确标签，以尽量减少样品混淆和误认的风险。图1说明了标记过程的一个示例。
1。将血小板样本（来自上面的“样本采集”部分）放在一排微型胶管架中。
2。将2毫升微胶管放在血小板样品上方一排，每个血小板样品用1支2毫升微胶管。使用细尖长久性墨水实验室标记，在其下的血小板样品上用相同的池ID标记每个2毫升的微胶管。确认2毫升微胶管上的ID与血小板样品相同。如果ID不正确，请丢弃2毫升微型胶管，并贴上新的2毫升微型胶管标签。仅使用随Bactx®套件提供的2毫升微型胶管。
三。将1.5 ml微胶管放在2 ml微胶管上方的一排，每个血小板样品用1.5 ml微胶管。使用细尖长久性墨水实验室标记器，在其正下方的2毫升缩微胶管上用相同的ID标记每个1.5毫升缩微胶管。确认1.5毫升微型胶管上的ID与下面的2毫升微型胶管相同。如果ID不正确，请丢弃1.5毫升的微粉管，并贴上新的1.5毫升微粉管标签。仅使用随Bactx®套件提供的1.5毫升微型胶管。
4。将Bactx®反应管放在1.5 ml微胶管上方的一排，每个血小板样品有一个反应管。在每个Bactx®反应管标签上打印的样品ID空间中，使用细尖长久墨水实验室标记在每个Bactx反应管上写入与其下方1.5 ml微胶管上相同的ID。

准备Bactx®样品：
1。使用单通道1000L微量移液器，将1.0 ml的溶解试剂移到每个空的2 ml微型移液管中。加入溶解试剂后，关闭各管上的盖子。
2。用单通道1000L微量移液器，将0.5 ml中和试剂移液到每个空的1.5 ml微型移液管中。加入中和剂后，关闭各管上的盖子。
三。从机架中左边位置的血小板样品（图1中的示例中的p1）开始，使用微量移液器将0.5 ml血小板转移到直接在其上方含有溶解试剂的2 ml微胶管中。
立即盖上2毫升微胶管上的盖子，将管倒置3次混合，然后将2毫升微胶管放回机架中的原始位置。确认血小板仅从位于
在2毫升微型胶管的正下方。不要丢弃血小板样品。对剩余的血小板样本重复此步骤，从左到右进行操作。
4。在14000–20000xg下对2 ml微粉管进行离心3分钟。一旦离心结束，小心地将2 ml微粉管放回管架，确保将管放置在与之前*相同的位置。
确认2毫升微胶管的ID与血小板样本上的ID匹配。

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5。打开机架左边位置的2毫升试管（图1中示例中的p1），将试管倒置3秒钟，将上清液倒入废物容器中。清除剩余液滴
将倒置的试管轻敲在废物容器的边缘，或将倒置的试管轻敲在干净、干燥的实验室纸巾或纸巾上。关闭管上的盖。检查管子，确认
白色胶状颗粒仍然存在。如果颗粒丢失，必须使用另一个0.5毫升血小板制备新样品。将2毫升试管放回机架中的位置。对剩余的2毫升微胶管重复此步骤，
从左到右工作。
6。使用微量移液器和干净的无菌移液管将0.5 ml提取试剂转移到机架左边位置的2 ml微胶管中（图1中的示例中的p1）。一只手握住2毫升的微粉管，将移液器设置为0.5毫升，上下移液10次，使移液器活塞回到初始位置，然后*压下活塞。这项技术将确保整个体积通过移液管。为避免产生过多的泡沫，上下吸液时，吸液管的开口应始终靠近微胶管的底部。将2毫升微型胶管放回机架中的原始位置。

7。验证1.5 ml微胶管的ID是否与管架上同一列中2 ml微胶管、血小板样品和反应管上的ID匹配。
8。应在Bactx®分析中立即测试样品。
执行Bactx®分析：
1。从Bactx®反应管左边的位置（图1中的示例中的p1）开始，通过将脱盖器的带刺端插入到盖的内唇下，从Bactx®反应管上拆下绿色盖。轻轻地转动去盖器以拆下盖。将绿盖弃置在适当的废物容器中。返回bactx®
反应管在机架中的原始位置。对其余的Bactx®反应管从左到右重复此步骤。
2。验证Bactx®反应管的ID是否与位于其正下方一行的1.5 ml微胶管上的ID匹配。
三。从左边位置的1.5 ml微胶管（图1中的示例中的p1）开始，使用干净的无菌移液管将0.3 ml从1.5 ml微胶管直接转移到位置的Bactx®反应管中。
在上面。对剩余的1.5 ml微粉和Bactx反应管从左到右重复此步骤。
4。以大速度旋转每个Bactx®反应管3秒钟，以混合并将每个Bactx®反应管返回机架中的原始位置。验证Bactx®反应管上的ID是否与位于其正下方一行的1.5 ml微胶管上的ID匹配。
5。将位于管架左边位置的Bactx®反应管放入Bactx®读卡器的管槽1中。确保反应管底部接触到Bactx®读卡器的管槽底部。在bactx的sample id字段1中输入血小板池id。
软件窗口。验证输入到“样本ID”字段中的样本ID是否与管架上同一列中1.5 ml、2 ml和血小板样本管上的ID匹配。对其余的反应管从左到右重复此步骤。
6。应将技术人员的ID（2-40个字符）输入到Bactx®软件窗口顶部的“Technician ID”字段中。将所有反应管放入Bactx®阅读器后，单击“Start all samples”（开始所有样品）按钮。测试将运行30分钟。按照bactx®读卡器用户手册中的说明保存bactx®分析结果。遵循机构处理数据文件的指南。