细胞周期检测试剂盒

Enzo Life Sciences的CELLESTIAL^® 系列产品涵盖了广泛应用于活细胞分析的荧光分子探针，用于要求严格的成像应用，如共聚焦显微镜、流式细胞仪和高内涵筛选（HCS），具有需要一致性和可重复性。

NUCLEAR-ID^® Green （绿色荧光）和GFP-CERTIFIED^® NUCLEAR-ID^®（红色荧光）两款周期分析试剂盒，为通过流式细胞术进行细胞周期进程的诱导和抑制研究提供了一种便捷的方法，且细胞周期检测结果不受培养时间、温度、染料和细胞密度影响。可以用于以下方面：

（1）确定给定样品处于Ｇ0/Ｇ1，Ｓ和Ｇ2/Ｍ 期细胞的百分比，以及细胞凋亡之前定量亚Ｇ1期的百分比；

（2）正常细胞系和表现出多倍性细胞系的活细胞、透性化及固定细胞的 DNA 研究。

本试剂盒可用于约100次的流式细胞仪检测。使用 Nocodazole 诺考达唑处理的细胞作为对照以检测细胞周期动力学的变化。活细胞研究也可应用于细胞 DNA 含量的测定、细胞周期增长模式变化的检测、细胞凋亡监测，以及评估肿瘤细胞变化和抑制基因机制。

◆NUCLEAR-ID^® Green cell cycle kit

ENZ-51014-100

本试剂盒中荧光染料为绿色。不适用于含绿色荧光蛋白或用 FITC 等绿色染料标记的细胞。

 

●　应用：流式细胞仪，荧光显微镜检测

●　样品类型：正常细胞系和表现出多倍性细胞系，活细胞、透性化细胞及固定细胞均可

●　储存温度： -20°C短期保存，-80°C长期保存

●　试剂盒组分：NUCLEAR-ID^® Green Cell Cycle Detection Reagent, 100 µL

●　试剂盒组分：Nocodazole Control, 10 µL

●　试剂盒组分：10×Assay Buffer, 15 mL

特点

●　染色方法简便，加入染料后直接通过流式细胞仪分析（100 tests）

●　激发光波长 488 nm，发射光波长 530 nm，显示为绿色荧光

●　不需要细胞打孔或 RNA 酶处理

●　结果不受细胞周期培养时间、温度、染料和细胞密度影响

●　从活的或固定细胞中读取 DNA 内容信息

●　监测由药物治疗或其他干扰引起的细胞周期动力学的变化采用大范围的细胞密度进行性能验证

◆NUCLEAR-ID^® Red cell cycle kit (GFP-CERTIFIED^®)

ENZ-51008-100

本试剂盒中荧光染料为红色。对于含绿色荧光蛋白或用FITC等绿色染料标记的细胞同样适用。

 

●　应用：流式细胞仪，荧光显微镜检测

●　样品类型：正常细胞系和表现出多倍性细胞系，活细胞、透性化细胞及固定细胞均可

●　储存温度： -20°C短期保存，-80°C长期保存

●　试剂盒组分：NUCLEAR-ID^® Red Cell Cycle Detection Reagent, 200 µL

●　试剂盒组分：Nocodazole Control, 10 µL

●　试剂盒组分：10×Assay Buffer, 15 mL

特点

●　可检测活细胞，固定细胞和透化的细胞中 DNA 含量信息的完整试剂盒

●　稳定且高纯度的红色荧光染料

●　采用不同细胞密度进行性能验证

●　无需 RNase 处理

●　可检测药物处理或者其他因素引起的细胞周期变化

●　无需 UV 激发

●　无光漂白效应

●　可与其他探针与染料一同使用

●　制造严格、消除非特异性检测伪影

●　兼容 GFP 绿色荧光蛋白及 FITC

Figure 1: 使用结构化照明方法，绿色荧光蛋白表达（GFP表达）线粒体和细胞核之间的空间关系的三维重建

Figure 2: Drug treatments with live cells inhibit cell cycle progression at different phases.

活细胞药物治疗抑制不同阶段的细胞周期进程。

NUCLEAR-ID^® Red DNA Stain 与其他染料的比较

 

实验操作

A. 用NUCLEAR-ID^® 红色染料进行细胞染色后，使用流式细胞仪进行细胞周期 DNA 分析

1.　使用（或不使用）实验化合物处理细胞。试管中悬浮细胞液浓度低于5×10⁵ / mL。

2.　选择介质或普通细胞培养缓冲液与 NUCLEAR-ID^® 红色 DNA 染色溶液混合。

3.　推荐使用 NUCLEAR-ID^® 红色 DNA 染色溶液的250倍至500倍稀释液进行活细胞周期 DNA 分析（终浓度分别为40 μM至20 μM）。

4.　将细胞重悬于 0.5 mL 新稀释的染色溶液中。

5.　轻轻混合后，室温或37℃下孵育15-30分钟。

6.　直接用流式细胞仪分析细胞而无需进一步处理或洗涤。

7.　488 nm 激发激光分析样品使用流式细胞仪 PerCPCy5.5 或 FL3 通道检测。对于 633 nm 激发，选用适当的收集过滤器 > 700 nm，FL4 

      或 FL5，APC-Cy7 通道。

 

B. 经NUCLEAR-ID^® 红色染料染色的活细胞用荧光/共聚焦显微镜观察细胞核变化

1.　贴壁细胞：在含有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养贴壁细胞。当细胞达到所需的数量时，小心地除去培养基并稀释到（~100 μL）2000

      倍至 4000 倍（在选择培养基或缓冲液中）使 NUCLEAR-ID^® 红色 DNA 染料能够（终浓度分别为 5.0 μM 至 2.5 μM）覆盖到单层细胞。

      悬浮细胞：室温（RT）下以 400× 离心5分钟获得细胞悬浮液。小心吸除上清液，并进行 2000-4000 倍稀释（在选择培养基或缓冲液中）

      使 NUCLEAR-ID^® 红色 DNA 染料能够（终浓度分别为 5.0 μM 至 2.5 μM）覆盖到单层细胞。

2.　样品避光保存，并在37°C孵化15-30分钟。

3.　用 100 μL 缓冲液（如 PBS）洗涤细胞。去除多余的缓冲液，将盖玻片放在载玻片上。使用广角荧光或共焦显微镜（推荐放大 60 倍）观察染色

      后的细胞。使用标准罗丹明或德克萨斯红色过滤器集成像系统。

相关产品资料请点击下载：活细胞荧光分析 Ver.3

※ 本页面产品仅供研究用。研究以外不可使用。

相关产品：

NUCLEAR-ID^® Red DNA stain

NUCLEAR-ID^® DNA 红色染料细胞渗透性 DNA 染色，可广泛应用于高效液相色谱（HPLC）≥93％，流式细胞仪，荧光检测

产品编号	包装
ENZ-51014-100	200 µL

     

参考文献

1.	Growth-promoting and tumorigenic activity of c-Myc is suppressed by Hhex: V. Marfil, et al.; Oncogene 34, 3011 (2015), Abstract;
2.	Epigenetic regulation of planarian stem cells by the SET1/MLL family of histone methyltransferases: A. Hubert, et al.; Epigenetics 8, 79 (2013), Application(s): Cell cycle analysis of stem cells from freshwater planarian by flow cytometry, Abstract; Full Text
3.	Gene-specific factors determine mitotic expression and bookmarking via alternate regulatory elements: P. Arampatzi, et al.; Nucleic Acids Res. 41, 2202 (2013), Application(s): Fluorescence imaging of nuclear DNA of human cancer cells, Abstract; Full Text
4.	An intact retinoblastoma protein-binding site in Merkel cell polyomavirus large T antigen is required for promoting growth of Merkel cell carcinoma cells: R. Houben, et al.; Int. J. Cancer 130, 847 (2012), Application(s): Cell cycle analysis of cancer cell lines by flow cytometry, Abstract; Full Text
5.	Gomisin A enhances tumor necrosis factor-α-induced G1 cell cycle arrest via signal transducer and activator of transcription 1-mediated phosphorylation of retinoblastoma protein: P. Waiwut, et al.; Biol. Pharm. Bull. 35, 1997 (2012), Application(s): Cell cycle analysis of HeLa cells by flow cytometry, Abstract; Full Text
6.	A cell-permanent dye for cell cycle analysis by flow and laser-scanning microplatecytometry: Y.J. Xiang, et al.; Nat. Methods 6, an2 (2009), Abstract;

一般参考文献

1.	DNA measurement and cell cycle analysis by flow cytometry: R. Nunez; Curr. Issues Mol. Biol. 3, 67 (2001), Abstract;
2.	Methods in Cell Biology, Flow Cytometry: Z. Darzynkiewicz, H.A. Crissman and J.P. Robinson (editors and co-authors); Vol. I and II, (1994), Book,