LDH-细胞毒性检测Wako

LDH-Cytotoxic Test Wako

 

◆背景

　　在日本每年在动物实验中死亡的小鼠和大鼠达850万只。其中以兔子眼睛作为药品和化妆品检测的样本，利用德莱兹法观察角膜和结膜的变化检测毒性·刺激性的实验，是非常残忍的。

　　因此，开发了在in vitro条件下的动物实验代替传统动物实验。此方法可检测培养细胞的毒性和细胞增值能力，不仅可测定因试剂破坏细胞而流出的酶量，还可以使色素渗入到活细胞中。比实验动物法实惠且节省操作，可客观地测定其毒性。

　　本产品是使用培养细胞对各种试剂的毒性进行简便测定的试剂盒。

　　可以直接测定细胞膜受到试剂影响而死亡的细胞中的游离LDH（乳酸脱氢酶），灵敏性高。

 

◆优点

●　可用于吸附细胞·浮游细胞

●　使用酶测定法进行测定，可以对细胞毒性进行精确的定量测定

●　通过调节样品处理时间和显色反应时间可以调节灵敏度

●　使用吸光全自动定量绘图酶标仪可以对多数样品进行测定

●　测定波长：吸光560 nm

 

◆测定原理

　　在LDH的作用下乳酸会被丙酮酸氧化，而辅酶会被NADH还原。样品中根据LDH活性按比例生成的NADH会在心肌黄酶的作用下会将硝基蓝四氮唑还原，生成蓝紫色的双蚁酯。在560 nm（±10 nm）下测定这个显色液的吸光度。

	LDH法	MTT法
测定对象	死细胞（&活细胞）	活细胞
测定时间（处理样品后）	1小时内	4~5小时
微量毒性的测定	适用	适用
微量死细胞测定时的误差	小	大
结果的客观性	高	高

 

◆试剂盒构成

显色试剂 硝基蓝四氮唑还原

心肌黄酶，NAD（3.7mg/vial）——————————————5 mL用×10支

缓冲液 DL-乳酸锂（50mg/mL）——————————————————55 mL×11支

反应停止液 盐酸（1mol/L）————————————————————55 mL×11支

96孔微量滴定板—————————————————————————10块（未灭菌）

◆使用方法

实验步骤

96孔板（灭菌）

↓→添加细胞。37℃下过夜

↓→PBS清洗

↓→添加检测物。37℃，15分钟

↓→离心分离

上清液

 

◆用途

　　通过LDH法检测各种试剂毒性的试剂盒。

参考文献

[1]　Korzeniewski, C. andCallewaert, D. M. : J. Immunol. Methods, 64, 313 (1983)

[2]　Decker, T. andLohmann-Matthes, M. -L. : J. Immunol. Methods, 115, 61 (1988)