ISOGEN II

总RNA及小RNA提取试剂

离心后的沉淀	ISOGEN II 100 mL

　　ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中提取总RNA和小RNA的试剂。本品是含有苯酚和胍的均匀液体，根据与细胞成分的相互作用，能一步分离RNA。

　　使用旧产品（ISOGEN和ISOGEN-LS）需要添加氯仿，要进行液相分离，而本产品则无需此步骤。在样品中加入ISOGEN II溶解或是均质之后，添加水， DNA、蛋白质、多糖类等沉淀（不溶化），进行离心分离后可以去除（右图）。用酒精沉淀、洗净、溶解上清液之后，能分离出高纯度的RNA。若配合ISOGENOME 使用，也能够跟ISOGEN一样从同一样本中提取DNA。

◆特点

　　•　无需使用氯仿分离RNA

　　•　相比旧产品（ISOGEN等），小RNA的提取率更高

　　•　可以把高分子RNA（＞200 bases）和小RNA（＜200 bases）分离（也有不分离的方案）

　　•　混入的DNA较少，提取的RNA可以直接使用RT-PCR和定量RT-PCR

　　•　约一小时内可提取出RNA

◆用途

　　从活体组织提取RNA等等

◆产品列表

ISOGEN   II （10 mL、100 mL）
产品	包装	保存条件	备注
ISOGEN II	1瓶	2～10°C (阴暗处)	非医疗用剧毒物 外观：青色溶液 容器（塑料瓶）外配有袋子。

运输方法

　　本品在室温下运输。产品到达后，在2~10℃条件下保存即可正常使用。

◆使用案例

操作流程

・除了本产品，根据需准备RNase free water、乙醇、4-溴甲氧基苯异丙醇。
・可使用聚丙烯管，使用前确认是否能够承受离心强度（12K × g）及ISOGEN II（苯酚）。
・离心操作建议在4-28℃进行。

实验数据

1. 提取的RNA的电泳

2. 检验出miRNA
3. RT-PCR
4. RNA提取共沉淀剂效果（测定吸光度）
5. RNA取量的基准
6. 使用ISOGEN II从植物提取总RNA
7. 使用ISOGEN II从植物提取高分子RNA及小RNA分离＜改变流程＞

Data 1：提取的RNA的电泳

　　

　　按照ISOGEN及ISOGEN Ⅱ的操作顺序，提取RNA，进行电泳。

琼脂糖凝胶电泳
	M: RNA Ladder (编号:311-06261)   道1：ISOGEN    提取 总RNA (2 μg) 道2：ISOGENⅡ 提取 总RNA (2 μg) 道3：ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (2 μg) 道4：ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.2 μg)   1.2% Agarose S （甲醛变性） EtBr 染色

聚丙烯酰胺凝胶电泳
	道1：ISOGEN     提取 总RNA (5 μg) 道2：ISOGENⅡ 提取 总RNA (5 μg) 道3：ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (5 μg) 道4：ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.5 μg)   12% 聚丙烯酰胺凝胶 （Urea 变性） EtBr 染色

　　

　　▶　道1、2中，ISOGENⅡ与ISOGEN一样，可提取全DNA。

　　▶　道3、4中，ISOGENⅡ可区分200bases以上的高分子RNA及10~200bases的小RNA。

Data 2：检验miRNA

对使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ提取的总RNA进行3D-Gene Human miRNA Oligo chip分析 　▶　ISOGEN Ⅱ比ISOGEN更能显示miRNA。

Data 3：RT-PCR

　　使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ从Hela细胞提RNA作为模板。通过RT-PCR检测出β-actin基因。同时，进行不产生RT反应的控制组实验。

PCR条件

1：模板RNA量 500 ng 2：模板RNA量 100 ng 3：模板RNA量 20 ng M：Gene Ladder  （编号：316-06951）

　　▶　使用ISOGEN Ⅱ提取的RNA比使用ISOGEN抽提的RNA混入DNA较少。

Data 4：RNA提取共沉淀剂效果（测定吸光度）

　　ISOGEN Ⅱ的使用指南中分离小RNA时，对使用共沉淀剂Ethachinmate（Nippon Gene 产品编号：312-01791）或者Glycogen（和光纯药工业 产品编号：077-05311）时提取到小RNA情况进行了比较。

方法   按照使用指南，从Hela细胞及小鼠肝脏回收小RNA，检测吸光度，计算小RNA的含量。将使用Ethachinmate提取到的数量看作1，在图表中列出了含量的相对值。

　　▶　使用Glycogen作为共沉淀剂回收小RNA时的回收量较多，变异较少。

Data 5：RNA取量的基准

实验材料		高分子 RNA 的离析	总 RNA的离析
组织	肝脏	5～7 µg RNA/mg tissue	6～8 µg RNA/mg tissue
	肾脏、脾脏	3～4 µg RNA/mg tissue	3～4 µg RNA/mg tissue
	骨骼肌脑、肺	0.5～1.5 µg RNA/mg tissue	0.5～1.5 µg RNA/mg tissue
	胎盘	1～3 µg RNA/mg tissue	1～3 µg RNA/mg tissue
培养细胞	上皮细胞	5～8 µg RNA/106 cells	5～10 µg RNA/106 cells
	成纤维细胞	3～5 µg RNA/106 cells	4～6 µg RNA/106 cells

Data 6：使用ISOGEN II从植物提取总RNA

从植物抽提全RNA例子 (PDF 222KB)

Data 7：使用ISOGEN II从植物抽提高分子RNA及小RNA分离＜变化流程＞

从植物抽提高分子RNA及小RNA离析例子 (PDF 218KB)

◆注意事项

　　•　本品是实验研究用的试剂，不能作为医药品或其他目的使用。另外，如果您对试剂的基本的知识不了解，请不要使用。

　　•　ISOGEN II是非医疗用剧毒物（苯酚制剂），请小心操作。

　　•　使用时请穿着适当的防护设备（手套、眼镜等）。

　　•　操作场所保持通风，以免吸入蒸汽。

　　•　如果接触皮肤或眼睛，请用大量的水冲洗15分钟或以上，并及时就诊。

　　•　请按照说明书进行操作。

　　•　对于因不按照说明书操作而导致的事故，Nippon Gene不负任何责任。

◆备注

　　本产品是实验研究用试剂，请勿用作医疗用途。

◆资料 Data Sheet

产品说明书

　　•　ISOGEN II　产品说明书第三版（100 mL产品小冊子） (PDF 195KB)

　　•　(内容与册子相同） (PDF 168KB)

SDS(Safety Data Sheet)

　　•　ISOGEN II 　安全数据图表(PDF)

宣传单

　　•　册子（PDF 2MB）

◆相关产品

　　 •　RNA抽提用试剂　ISOGEN、ISOGEN-LS

　　 •　RNA抽提用试剂　ISOGEN with Spin Column

　　 •　酒精沉淀用共沉淀剂　Ethachinmate

　　 •　缓冲器　ddWater, TE（pH 8.0）

Q：可以从全血等血液样本中抽提RNA吗？

A：ISOGEN II 难以提取出高纯度的RNA，建议使用ISOGEN-LS。

Q：可以提取DNA或蛋白质吗？

A：旧法使用 ISOGEN，可以从同一样本回收DNA及蛋白质，但由于此次研发的是提取RNA的方法，ISOGEN II 中混入的DNA较少，无法提取DNA

     及蛋白质。不过，配合使用DNA提取试剂 ISOGENOME，可回收DNA样本。

参考文献

[ 1 ]	Chomczynski, P. ： Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending.
[ 2 ]	Chomczynski, P. and Sacchi, N.：”Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol- chloroform extraction”, Anal. Biochem，162, 156-159（1987）
[ 3 ]	Chomczynski, P.：”A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples”, Biotechniques,15, 532-537（1993）
[ 4 ]	Wilfinger, W., Mackey, K. and Chomczynski, P.：”Effect of pH and ionic strength on the spectrophotometric assessment of nucleic acid purity”,Biotechniques, 22, 474-481（1997）