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Cell Technology成立于1998年，致力于为研究院、生物技术公司及制药企业的科研人员研发生产*的细胞功能研究用试剂与试剂盒。这些检测试剂与试剂盒可以实现不破坏细胞形态和结构的情况下原位检测细胞成分，研究细胞内发生的特定事件.Cell Technology发布了通过测定胞内活性caspase及线粒体膜电位研究细胞凋亡的一系列试剂。随着公司研发团队的持续努力，我们又推出了一系列高特异性的caspase检测试剂，以及cathepsin检测的试剂和ELISA试剂盒。目前Cell Technology提供的检测试剂和ELISA试剂盒涵盖Caspase、NOS、ROS、线粒体膜电位、信号通路和蛋白磷酸化等多个研究领域，产品倍各大高校、研究机构、生物技术企业和制药企业采用。
MitoCasp
同时双参数测定：线粒体膜电位检测和半胱氨酸蛋白酶（poly，3/7，8，9，1）活性。申请中*
产品描述
主要优点
- 同时检测线粒体膜电位和半胱天冬酶活性。
- 读数 – 流式细胞术，荧光读板器，荧光显微镜。
- 可靠：产生定量和定性的结果。给出强烈的积极信号。
- 该试剂盒可以与其他抗体或污渍一起使用。
- 使用简单：无需制作细胞裂解液或运行Western印迹。
- 细胞渗透性试剂。
背景
Caspase检测
Apoptosis is an evolutionarily conserved form of cell suicide, which follows a specialized cellular process. The central component of this process is a cascade of proteolytic enzymes called caspases. These enzymes participate in a series of reactions that are triggered in response to pro-apoptotic signals and result in cleavage of protein substrates, causing the disassembly of the cell (1).
Caspases have been identified in organisms ranging from C. elegans to humans. The mammalian caspases play distinct roles in apoptosis and inflammation. In apoptosis, caspases are responsible for proteolytic cleavages that lead to cell disassembly (effector caspases), and are involved in upstream regulatory events (initiator caspases). An active caspase consists of two large (~20 kD) and two small (~10 kD) sub units to form two heterodimers, which associate in a tetramer (2-4). As is common with other proteases, caspases are synthesized as precursors that undergo proteolytic maturation, either autocatalytically or in a cascade by enzymes with similar specificity (5).
线粒体膜电位检测
线粒体膜电位的丧失是细胞凋亡的标志。线粒体通透性转换是诱导细胞凋亡的重要步骤。在此过程中，线粒体膜上的电化学梯度崩溃。认为崩解是通过二聚化的Bax或激活的Bid，Bak或Bad蛋白质在线粒体中形成孔而发生的。这些促细胞凋亡蛋白的激活伴随着细胞色素c释放到细胞质中（11-14）。
测定原理
Caspase（poly，3/7，8，9，1）和线粒体膜电位检测 – MitoCasp
半胱天冬酶特异性地识别必须包含天冬氨酸残基的4个氨基酸序列（在其底物上）。该残基是裂解反应的目标，其发生在天冬氨酸残基（6）的羰基末端。可以通过免疫沉淀，使用半胱天冬酶特异性抗体的免疫印迹技术，或通过使用在半胱天冬酶切割时变成荧光的荧光底物来检测半胱天冬酶。MitoCasp使用一种新方法来检测活性半胱天冬酶（7-9）。该方法基于羧基荧光素（FAM）标记的氟甲基酮（FMK）肽半胱天冬酶抑制剂。这些抑制剂是细胞可渗透的和无细胞毒性的。一旦进入细胞内，抑制剂就会与活性半胱天冬酶共价结合（10）。含有结合抑制剂的细胞可以通过流式细胞术或荧光显微镜分析。
Cell Technology利用阳离子染料显现线粒体膜电位（15-17）。阳离子染料是可渗透细胞的，并且在红色区域具有强烈的荧光信号，并表现出低膜电位独立（非特异性）结合和毒性。在健康细胞中，阳离子染料通过与DeltaPsi（膜电位）成比例的线粒体累积。在大多数细胞系中，阳离子染料在线粒体中的积累导致更高的荧光强度。在线粒体膜电位受损的凋亡细胞中，阳离子染料不累积在线粒体中，并且这些细胞表现出较低的荧光信号。可以同时分析利用这两种试剂结合半胱天冬酶活性和线粒体膜电位。引文鉴定单域Bax-spec
Jurkat细胞用星形孢菌素刺激3小时（B）或DMSO（A）。然后按照方案用MitoCasp试剂盒对细胞进行染色。然后将细胞洗涤两次并通过流式细胞术分析：实例：488nm Em：FL1和FL2。
图A.健康细胞显示出强烈的红色荧光，表明完整的线粒体并且没有绿色荧光，表明没有活性半胱天冬酶。
图B：凋亡细胞显示红色荧光损失（y轴），表明线粒体膜电位损失，正绿色荧光（x轴）表明活性半胱氨酸蛋白酶。
Product Name: MitoCaspTM
Catalog # MITCAP100-1 and 100-2, MITCAP200-1 and 200-2, MITCAP300-1 and 300-2, MITCAP400-1 and 400-2, MITCAP600-1 and 600-2
Components:
Part# 4015: Mitochondria Membrane Potential Dye (Cationic Dye)
Part# 3032: 1X Dilution Buffer
Part# 8001: FAM-VAD-FMK (Poly Caspase)
Part# 3028: 10 X Wash Buffer