重组赖氨酰内肽酶RLys-C
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重组赖氨酰内肽酶RLys-C
◆概述
赖氨酰内肽酶最早从土壤细菌无色杆菌Achromobacter lyticus中分离得到，能够特异性识别与切割肽链中Lys羧基端肽键，常被用于蛋白测序及Lys-X化合物的酶催化合成。
艾美迪选用Achromobacter lyticus来源的，克服大肠杆菌重组表达技术难题进行制备。本品最适pH 9.0~9.5,等电点为pH 6.9~7.0；最适反应温度30~37℃，50℃以上稳定性下降。在适宜温度下，该酶稳定性良好，在4 mol/L尿素或0.2%SDS溶液中30℃孵育6 hr后，生物活性未发生降低。可广泛用于蛋白组学分析，蛋白、抗体类药物质量检测，多肽、蛋白类产品制备工艺中。
◆特性
● 高比活性，高特异性，可消化难以酶切的位点，空间构象复杂或疏水性较强的蛋白（如膜蛋白）同样适用
● 活性稳定，对尿素、乙腈等变性剂耐受能力强
● 批量化生产，连续批次质量稳定，批间差小
● 高纯度，重组表达避免了可能存在的杂酶残留（e.g. Arg-C，Lys-N等）
◆来源
重组 E. coli 菌株，其克隆有来自的无色杆菌（A. lyticus）的蛋白酶I基因。
◆酶活定义
在0.2 mol/L pH 9.0的Tris-HCl缓冲中，温度为37±2℃的条件下， 1 min催化底物AC-Lys-PNA生成1 μmol PNA所需的酶量为一个活性单位（AU）。
◆纯度
将 rLys-C以DTT 还原处理后， 还原电泳显示纯度＞99%
◆使用方法
本品为冻干粉，使用前先使用超纯水或25 mmol/L Tris-HCl，pH 8.0~8.5溶解。
◆应用实例
RLys-C酶切重组人门冬胰岛素原（Pro-Insulin-Aspart）
底物Pro-Insulin-Aspart分子量约为7 kDa，含有3个赖氨酸（K），采用 Lys-C 酶切的理论肽段示意图如下：
酶切条件：酶与底物的质量比为 1：10000，在50 mM Tris-HCl，pH 8.5中37℃酶切16 小时。
峰 A：酶切前肽段 Pro-Insulin-Aspart
峰 B：酶切后 B链+C肽+A链（去引导肽）
峰 C：酶切后B链+A链（去引导肽和C肽）
|
名称 |
RT |
Area |
Area% |
质谱量 |
酶切位点 |
对应肽段 |
|
Pro-Insulin-Aspart |
10.45 |
155.045 |
100% |
7096.94 |
/ |
酶切前 |
|
以IMD-RLys-C-酶切产物 |
11.57 |
201.6 |
100% |
5724.54 |
① ② ③ |
B链+A链 |
|
以其他公司重组Lys-C酶产物 |
10.49 |
146.9 |
61.78% |
7096.94 |
/ |
酶切前 |
|
10.62 |
81.5 |
34.29% |
6006.84 |
① |
B链+C肽+A链 |
艾美迪的 RLys-C 酶切产物为切除引导肽和 C 肽的门冬胰岛素前体，酶切位点①②③均酶切完全。
而其他公司产品仅部分切开酶切位点①，切除效率仅为34.29%，酶切位点②③均未被酶切，未能得到序列正确的门冬胰岛素前体。
◆与其他公司产品对比
|
底物 |
酶切位点对比 |
艾美迪 |
其他公司重组Lys-C |
|
重组人门冬胰岛素原 （Pro-Insulin Aspart） 分子量约为7 kDa，含有3个K |
①PK↓ |
++ |
+ |
|
②DK↓ |
++ |
– |
|
|
③GK↓ |
++ |
– |
|
|
重组人普通胰岛素原 （Pro-Insulin） 分子量约为7 kDa，含有3个K |
①PK↓ |
++ |
+ |
|
②PK↓ |
++ |
+ |
|
|
②AK↓ |
++ |
+ |
|
|
PJ-10S小肽 |
①DK↓ |
++ |
+ |
相同底物浓度的酶切条件下艾美迪的 RLys-C 的酶切效率显著高于其他品牌同类产品。以生成的肽段 YDDDDK 计算，艾美迪的RLys-C 的酶切率比其他品牌同类产品高约9倍；以生成的肽段 RGWK 计算，艾美迪的RLys-C的酶切效率比其他品牌同类产品高约8.6倍。
◆产品信息
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 |
| RLYS-C0401 |
RLys-C 重组赖氨酰内肽酶 |
20 μg |
| RLYS-C0403 |
RLys-C 重组赖氨酰内肽酶 |
1 mg |
◆相关产品
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 |
| RME0101 |
Lys-C + Trypsin 重组赖氨酰内肽酶/重组胰蛋白酶混合装 |
20 μg |
| RME0102 |
Lys-C + Trypsin 重组赖氨酰内肽酶/重组胰蛋白酶混合装 |
20 μg×5 |
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 储存条件 | 其他 |
| IRLys-C0401 | immobilized RLys-C 固定化重组赖氨酰内肽酶 |
1.0 mL | -15℃以下 | 1.0 mL含1.0 mg |
| MDRK0401 | RLys-C ELISA Kit 重组赖氨酰内肽酶检测试剂盒 |
96孔 | -15℃以下 |
检测范围： 1.0～4000 ng/mL |
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
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