Cellstor S • Cellstor W 室温/冷藏条件下进行细胞的运输和短期保存!

Cellstor S • Cellstor W
室温/冷藏条件下进行细胞的运输和短期保存!

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

室温/冷藏条件下进行细胞的运输和短期保存!Cellstor S • Cellstor W                              室温/冷藏条件下进行细胞的运输和短期保存!

Cellstor S · Cellstor W

株式会社大塚制药工厂的Cellstor S 和 Cellstor W均为用于冷藏和常温保存的细胞悬浮保存液细胞清洗保存液

不含人或动物来源的成分,按照GMP标准进行生产管理和品质管理。


※本产品为研究用试剂,不作为人或动物的医疗用途。

Cellstor S • Cellstor W                              室温/冷藏条件下进行细胞的运输和短期保存!


◆特点


● 常温/冷藏条件下保存细胞

 按照GMP标准进行生产管理

 不含人或动物来源的成分

◆Cellstor S 和 Cellstor W各自的使用方法


Cellstore S 含有葡聚糖40(Dextran 40),不适用于离心操作下的细胞清洗。

如果需要离心,推荐使用不含葡聚糖40的Cellstore W。

Cellstor S • Cellstor W                              室温/冷藏条件下进行细胞的运输和短期保存!

◆成分及含量


■ 每袋(250 mL)

成分

Cellstore S

Cellstore W

葡聚糖 40

12.5 g(5%)

海藻糖水合物

8.29 g(3%)

氯化钙水合物

0.05 g(0.02%)

氯化钾

0.075 g(0.03%)

氯化钠

1.5 g(0.6%)

L-乳酸钠

0.775 g(0.3%)

pH调节剂

适量

注射用水

适量

◆应用案例1


观察经时细胞存活率的变化


将人脂肪来源的间充质干细胞悬浮于 Cellstore S、Cellstore W、乳酸林格溶液或其他保存溶液中,测定随时间变化的细胞存活率。

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■ 经时变化的细胞存活率(保存在25°C) 常 温 


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● 细胞类型:人脂肪来源的间充质干细胞

● 细胞浓度:5 x 105 cells/mL

● 保存温度:25°C

 

24小时后的细胞存活率

● Cellstore S:98.1%

● Cellstore W:95.6%


■ 经时变化的细胞存活率(保存在5°C) 冷藏 

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● 细胞类型:人脂肪来源的间充质干细胞

● 细胞浓度:5 x 105 cells/mL

● 保存温度:5°C

 

24小时后的细胞存活率

● Cellstore S:95.1%

● Cellstore W:93.5%

在以上温度条件下,至少可保持24小时的高存活率

◆应用案例2


细胞集落形成率


将人脂肪来源的间充质干细胞悬浮于 Cellstore S 或 Cellstore W 中,在 5°C 或 25°C 下保存 6 h或 24 h后进行再接种,并评估集落形成率。

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在以上温度条件下,至少可维持24小时的集落形成率

◆应用案例3


确认脂肪分化能力


将人脂肪来源的间充质干细胞悬浮于Cellstore S或Cellstore W中,在5°C或25°C下保存24 h后诱导分化为脂肪细胞,通过油滴被油红染成红色来确认脂肪分化能力。

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◆应用案例4


确认骨分化能力


将人脂肪来源的间充质干细胞悬浮于Cellstore S或Cellstore W中,在5°C或25°C下保存24 h后诱导分化为成骨细胞,通过碱性磷酸酶染色(蓝色)或茜素红S(红色)所显示的钙化,来确认骨分化能力。

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◆应用案例5



确认细胞悬浮性能


将人脂肪来源的间充质干细胞悬浮于Cellstore S、生理盐水或乳酸林格溶液中,静置1 h后的计算悬浮细胞率(以100%计算悬浮后不久的悬浮细胞数)。

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Cellstore S至少可维持细胞1小时的悬浮状态

◆应用数据     ~与STEMFULL配合使用,提高细胞回收率~


使用住友电木的“STEMFULL”作为保存容器,提高了人脂肪来源间充质干细胞(hAD-MSCs)的细胞回收率(保存温度:25°C或5°C)。

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   STEMFULL(产品编号:637-28691)为15 mL 锥形管,其PET 树脂经过低吸附处理,用于细胞回收。


   【特点】

   ● 尤其抑制干细胞等吸附性高的细胞对试管的吸附,回收率UP

   ● 化学共价结合基材表面和聚合物,减少表面处理来源的析出物

   ● 透明性优异


   可使用的温度:-80°C~40°C

   离心强度:4,640 g(离心10 min,使用摆动转子、橡胶垫)

25°C下的使用案例


将人脂肪来源的间充质干细胞(hAD-MSCs)悬浮于 Cellstore W 或 Cellstore S 中,并保存在 25°C 的普通离心管或 Stemfull 中,评估随时间变化的细胞回收率和细胞存活率。

细胞类型:hAD-MSCs

细胞浓度:5×105 cells/mL

保存温度:25℃


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平均值±标准偏差(0, 3, 6 h;n=4, 24 h; n=3)、*:p<0.05,***:p<0.001 Student的t鉴定
†:p<0.05、 ††:p<0.01、 Dunnett的多重比较鉴定 保存0 h后 vs 其他时间


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平均值±标准偏差(n=4)、 **:p<0.01, ***:p<0.001 Student的t鉴定

†:p<0.05、††:p<0.01、 †††:p<0.001 、Dunnett的多重比较鉴定 保存0 h后 vs 其他时间

    将悬浮于Cellstore W或Cellstore S的hAD-MSCs保存在25°C的Stemfull中,细胞存活率可维持在高水平,在Cellstore W中至少

    24小时,在Cellstore S中至少6小时。比保存于普通离心管中的细胞回收率更高。

5°C下的使用案例


将悬浮于Cellstore W或Cellstore S的人脂肪来源的间充质干细胞(hAD-MSCs)保存在5°C的普通离心管或 Stemfull中,并评估细胞回收率和细胞存活率随着时间的变化。

细胞类型:hAD-MSCs

细胞浓度:5×105 cells/mL

保存温度:5℃

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平均值±标准偏差(n=6)、*:p<0.05,**:p<0.01 Student的t鉴定
不认可在各容器中保存0 h后与其他时间的有意差(Dunnett的多重比较鉴定)

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平均值±标准偏差(n=4)、*:p<0.05,**:p<0.01 Student的t鉴定

不认可在各容器中保存0 h后与其他时间的有意差(Dunnett的多重比较鉴定)

    将悬浮于Cellstore W或Cellstore S的hAD-MSCs保存在5°C 的Stemful中,可保持至少24小时的高细胞存活率,比保存于普通离心

    管中的细胞回收率更高。

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
637-46391 Cellstor-S 250 mL
630-46401 Cellstor-W 250 mL

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液 ThelioKeep®

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液
ThelioKeep®

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

ThelioKeep®

ThelioKeep是一种不含DMSO和血清蛋白,适用于上皮、内皮组织以及神经组织的冷藏保存液。


 本产品仅供研究使用。研究以外不可使用。

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

◆特点•优势

 

● 维持物理性质上较为脆弱的组织膜形态,保持增殖功能的同时可冷藏(4~10°C)保存1~2周。

● 在绿茶茶多酚(表没食子儿茶素没食子酸酯:EGCG)的保护作用下,可保存薄且脆弱的组织。

● 除上皮、内皮组织之外,也可用于神经组织使用。末梢神经可维持电生理功能。

● 适用于包含人、小鼠、大鼠在内的大多数哺乳动物组织。

● 保存后的组织经过清洗,可用于使用了适当培养基的各种实验。

● 不含血清以及蛋白成分,DMSO、甘油等防腐剂。

● 已通过无菌测试确认本产品不含细菌、真菌、支原体。

● 本产品由液体、固体防腐剂各一支组成套装,未开封(制备前)的状态下可在4°C下保存约1年。

● 成分:无机离子,D-葡萄糖,氨基酸,pH调节剂(液体防腐剂),表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),

● 酚红(固体防腐剂)

◆应用实例1


无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

比较人角膜内皮组织的形态以及增殖速度

用本产品(右)和其他公司产品(左)保存人角膜内皮组织2周(4°C)后比较其形态(左图)。使用本产品保存的组织可维持六角形的细胞膜形态。相反,使用其他公司产品保存的组织的细胞膜形态已完全消失。另外,已确认使用本产品保存的组织以约2倍的速度增殖(右图)。

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

比较神经组织的形态以及电导率

用本产品(右)或其他公司产品(左)保存大鼠末梢神经组织2周(4°C)后,移植到另一只大鼠,再经过24周后取出,使用透射电子显微镜观察形态(左图)与运动神经传导速度(MCV:右图)。新鲜组织表示未经保存的神经移植后的数值。

假设移植前神经的MCV值为100%。可确认使用本产品保存的组织在移植24周后仍然保持形态不萎缩并保持完好的功能。

图像中柱状长度为20 μm。



参考文献

Ikeguchi, R., et al., Experimental Neurology184, 688~696 (2003).

Ikeguchi, R., et al., Transplantation79, 688~695 (2005).

◆应用实例2


无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

使用本产品保存的人培养骨膜片进行二次培养时的增殖情况

将培养了21天的人培养骨膜片在4°C下保存2天后,再次进行培养。



无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

川濑老师(右)与研究室的成员

数据提供:新泻大学牙科系 牙科基础移植、再生医学领域 川濑知之老师

参考文献:Kamiya, M., et al., Biopreservation and Biobanking10 (3), 245~252 (2012)

◆应用实例3

人来源培养口腔黏膜上皮细胞片保存前后的评估

(1)培养上皮细胞片的回收试验(2)总细胞数

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

(3)培养上皮细胞切片中的细胞活率

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

(4)HE染色图

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

保存前



无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

保存后

无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

保存后



● 细胞:人来源培养口腔黏膜细胞片

● 培养皿: 35 mm UpCell(R)(CellSeed株式会社)

● 培养条件:37°C ,5%CO2 14天

● 保存条件:4°C,7天

将人来源口腔粘膜上皮细胞放在35 mm UpCell(R)中与NIH-3T3共培养14天,制备培养上皮细胞片。

然后,将培养上皮细胞片浸于各种保存液(PBS、ThelioKeep(R))中,在4°C下静置7天。

保存后的第7天,进行(1)回收细胞片;(2)总细胞数;(3)细胞活率检测(使用流式细胞仪分析7-AAD染色)以及(4)HE染色,比较保存前后的状态。


无DMSO的皮肤及神经组织用冷藏保存液                              ThelioKeep®

香取老师(第一列右)、林老师(中间)与研究室的成员


数据提供:大阪大学 研究生院 医学研究科 脑神经感应外科 眼科 香取良祐老师、林龙平老师

◆操作方法概要

1. 在无菌条件下向附带的含有防腐剂(EGCG)的微管中加入约0.5 mL本产品并溶解,溶解后将所有溶液倒回

1. ThelioKeep的瓶中并搅拌。

2. 确认防腐剂完全溶解后,向离心管等容器加入数mL溶液,在4~10°C下冷却。

3. 将从实验动物中切除的上皮、内皮组织浸没于上一步的溶液中,盖好盖子在4°C下保存。

4. 使用预冷PBS轻轻清洗上一步保存的组织后,转移至实验用培养基中,在组织存活状态下用于实验。

 

※ 所制备溶液请尽快使用。分装时可在-20°C下保存1~2周。

※ 培养时,请提前将保存液恢复到正常生理活性温度(如37°C)。

※ 在制备切片等组织标本时,请快速将其固定。

※ 提取组织内的物质时,请提前在预冷的PBS中仔细清洗

 

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
TPO-A1 ThelioKeep
 皮肤组织保存液
100ml