巨噬细胞去除实验

  去除巨噬细胞是研究巨噬细胞功能的重要方法。巨噬细胞可吞噬 clodronate Liposome， 在溶酶体的作用下，clodronate 可释放出来，当其达到一定浓度时，可引起巨噬细胞的凋亡， 从而去除巨噬细胞。clodronate Liposome 可局部注射去除注射部位临近的巨噬细胞，如肺、 膝关节、肿瘤局部和脑等；也可尾静脉或腹腔注射去除循环途径中的单核巨噬细胞，如肝脏 和脾脏中的巨噬细胞。
1. 脂质体的准备 可以自己制备或者购买商品话的脂质体 荷兰clodronaiposomes和美国Formumax Scientific公司都可以提供现成的商品化的高质量clodronate Liposome 具体信息如下
 
 
货号 品名 包装 价格 品牌   
F70101C-N Clodronate Liposomes 不含对照 去除率85% 2ml 2985 FormuMax   
F70101C-N Clodronate Liposomes 不含对照 去除率85% 10ml 10485 FormuMax   
F70101-N Control Liposomes 对照 2ml 1485 FormuMax   
F70101-N Control Liposomes 对照 10ml 5235 FormuMax   
F70101C-NC Control Liposomes 含对照 去除率85% 2ml 3585 FormuMax   
F70101C-NC Control Liposomes 含对照 去除率85% 10ml 12585 FormuMax   
F70101C-A Clodronate Liposomes 不含对照 去除率95% 2ml 4485 FormuMax   
F70101C-A Clodronate Liposomes 不含对照 去除率95% 10ml 15735 FormuMax   
F70101C-AC Clodronate Liposomes 含对照 去除率95% 2ml 5235 FormuMax   
F70101C-AC Clodronate Liposomes 含对照 去除率95% 10ml 15735 FormuMax   
Clodronate  Clodronate Liposomes and PBS Liposomes per 10ml 10ml 4500 clodronaiposomes 

2. 脂质体的体内注射 隔日尾静脉注射 200ul clodronate liposome，根据实验要求制定注射日程。通过免疫组化 或流式检测巨噬细胞的去除效率。
尾静脉注射方法： 尾静脉注射方法：
 1. 将小鼠放在倒扣的饭盒内，从孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉，2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面，3 条静脉呈品字型分布,一般采用左右两侧的静脉；
2. 将纱布浸泡于约 70 度的温水中，拿出后包裹尾巴，以达到使尾部血管扩张及软化表皮 角质的目的；
3. 行尾部静脉注射时，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出约 2cm 一段，使皮肤紧张， 静脉更为充盈，右手持 1ml 针头注射器，使针头与静脉平行(小于 30°角)，从尾巴的下 1/4 处进针，开始注入药物时应缓慢，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明 已刺入血管，可正式注入药物。
4. 有的实验需连日反复尾静脉注射给药，注射部位应尽可能从尾端开始，按次序向尾根部 移动，更换血管位置注射给药。拔出针头后，用棉球按住注射部位轻压 1-2min，止血。

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去除巨噬细胞是研究巨噬细胞功能的重要方法。巨噬细胞可吞噬clodronate Liposome，在溶酶体的作用下，clodronate可释放出来，当其达到一定浓度时，可引起巨噬细胞的凋亡，从而去除巨噬细胞。clodronate Liposome可局部注射去除注射部位临近的巨噬细胞，如肺、膝关节、肿瘤局部和脑等；也可尾静脉或腹腔注射去除循环途径中的单核巨噬细胞，如肝脏和脾脏中的巨噬细胞。

1.       脂质体的准备

美国的FormuMax Scientific可以提供多种clodronate Liposome 具体产品可以上http://www.liposomeexpert.com查询， 

www.jinpanbio.com  021-50837765

2.       脂质体的体内注射

隔日尾静脉注射200ul clodronate liposome，根据实验要求制定注射日程。通过免疫组化或流式检测巨噬细胞的去除效率。

尾静脉注射方法：

1.       将小鼠放在倒扣的饭盒内，从孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉，2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面，3条静脉呈品字型分布,一般采用左右两侧的静脉；

2.       将纱布浸泡于约70度的温水中，拿出后包裹尾巴，以达到使尾部血管扩张及软化表皮角质的目的；

3.       行尾部静脉注射时，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出约2cm一段，使皮肤紧张，静脉更为充盈，右手持1ml针头注射器，使针头与静脉平行（小于30°角），从尾巴的下1/4处进针，开始注入药物时应缓慢，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，可正式注入药物。

有的实验需连日反复尾静脉注射给药，注射部位应尽可能从尾端开始，按次序向尾根部移动，更换血管位置注射给药。拔出针头后，用棉球按住注射部位轻压1-2min，止血。

Clodronate Liposomes体内巨噬细胞清除试剂

去除巨噬细胞是研究巨噬细胞功能的重要方法。巨噬细胞可吞噬 clodronate Liposome， 在溶酶体的作用下，clodronate 可释放出来，当其达到一定浓度时，可引起巨噬细胞的凋亡， 从而去除巨噬细胞。clodronate Liposome 可局部注射去除注射部位临近的巨噬细胞，如肺、 膝关节、肿瘤局部和脑等；也可尾静脉或腹腔注射去除循环途径中的单核巨噬细胞，如肝脏 和脾脏中的巨噬细胞。

1. 脂质体的准备 可以自己制备或者购买商品话的脂质体 荷兰clodronaiposomes

2. 脂质体的体内注射 隔日尾静脉注射 200ul clodronate liposome，根据实验要求制定注射日程。通过免疫组化 或流式检测巨噬细胞的去除效率。

尾静脉注射方法： 尾静脉注射方法：

 1. 将小鼠放在倒扣的饭盒内，从孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉，2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面，3 条静脉呈品字型分布,一般采用左右两侧的静脉；

2. 将纱布浸泡于约 70 度的温水中，拿出后包裹尾巴，以达到使尾部血管扩张及软化表皮 角质的目的；

3. 行尾部静脉注射时，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出约 2cm 一段，使皮肤紧张， 静脉更为充盈，右手持 1ml 针头注射器，使针头与静脉平行(小于 30°角)，从尾巴的下 1/4 处进针，开始注入药物时应缓慢，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明 已刺入血管，可正式注入药物。

4. 有的实验需连日反复尾静脉注射给药，注射部位应尽可能从尾端开始，按次序向尾根部 移动，更换血管位置注射给药。拔出针头后，用棉球按住注射部位轻压 1-2min，止血。 

FAQ:

Q:收到Clodronate liposomes后该如何操作？

A:收到氯磷酸脂质体后，如果不能马上使用，需要放置在4℃冰箱。禁止冻存！使用时作为原液使用，不能进行稀释。脂质体很容易发生沉淀，建议使用之前轻轻混匀，另外4℃的氯磷酸脂质体不能马上使用，需要恢复到室温才能进行注射。

Q: Clodronate liposomes能否用于体外巨噬细胞清除？

A:产品可以用于体外巨噬细胞的清除，但是这种方法比较适合体内实验。主要是由于在体外培养过程中，从死亡细胞释放的氯磷酸或者是从脂质体中“渗漏”出来氯磷酸，会一直存在于培养基中，但是在体内，氯磷酸的半衰期很短，很快就会被肾脏清除。虽然游离的氯磷酸不会进入细胞也不会进入脂质体，但是一旦他们在培养基中积累就会慢慢地进入细胞中。

Q:在静脉注射Clodronate liposomes后动物很快就死亡了，是什么原因？

A:一方面有可能是动物注射了不均一的脂质体悬液。建议在使用之前轻轻摇晃混匀。脂质体在体外一段时间后会发生沉降。如果在很长一段时间内需要一次注射多只动物，那么脂质体便会在注射器中发生沉淀，形成不均一悬液，这样一来，*只注射的计量与zui后一只注射的计量就会发生明显的变化。另外一方面有可能是脂质体刚从冰箱取出后，没有恢复到室温。

Q:动物在注射Clodronate liposomes后几天就死亡了？

A：这个可能是受到细菌的污染，体内清除巨噬细胞后会增加例如病毒粒子，细菌或者酵母感染的几率。

Q:静脉注射Clodronate liposomes后大鼠脾脏/肝脏中的ED1+细胞并没有*消失？

A：大鼠中成熟的巨噬细胞呈现ED1和ED2双阳性，但是有一些没有吞噬功能的或者吞噬作用小的前体细胞也是ED1+，但是呈现ED2-。因此，所有ED2+的细胞都可以被*清除，但是ED1+的细胞却只能被部分清除，清除的比率取决于前体/成熟巨噬细胞的比例。

Q: Clodronate liposomes没有达到期望的效果？

A：氯磷酸脂质体都是大批量的生产，每批次都会对氯磷酸的浓度以及一些可能的污染物进行检测，确保无误后才会销售给客户。另外，脂质体容易收到温度的影响。正确的运输和储存方式是4~8℃，悬液既不能被冻存，也不能被加热超过30℃。自收到货物起，需要在3个月内使用完，不然有可能会影响使用的效果。

Q:在静脉注射时，能不能增加注射的体积？

A：静脉注射时需要依据动物的体重，不能超过0.1ml/10mg，但是进行腹腔注射可以适当的增加注射的体积。皮下注射需要根据注射位点的容量进行决定。