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重组人EGFRvIII-ECD说明书

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重组人EGFRvIII-ECD说明书

 

描述：

EGFRvIII是表皮生长因子受体（EGFR）的截短亚型。 EGFRs（HER1-4）是受体酪氨酸激酶的一个亚家族。所有家庭成员都包括 细胞外结构域、间隔区和细胞内结构域构成催化部分。 EGFRvIII基因具有帧内缺失，导致氨基酸30-297的缺失 细胞外结构域和在融合点产生额外的甘氨酸（参见AA序列）。 这种突变变异是肿瘤特异性的，尚未在正常组织中发现。EGFRvIII 是组成性表达，在致瘤性、侵袭性和治疗耐药性中起关键作用。 EGFRvIII优先激活PI3K/Akt信号通路。

来源：

– 人类EGFR的原始全长DNA序列; AA 序列：

 

LEEKKGNYVV TDHGSCVRAC GADSYEMEED GVRKCKKCEG PCRKVCNGIG IGEFKDSLSI

NATNIKHFKN CTSISGDLHI LPVAFRGDSF THTPPLDPQE LDILKTVKEI TGFLLIQAWP

ENRTDLHAFE NLEIIRGRTK QHGQFSLAVV SLNITSLGLR SLKEISDGDV IISGNKNLCY

ANTINWKKLF GTSGQKTKII SNRGENSCKA TGQVCHALCS PEGCWGPEPR DCVSCRNVSR

GRECVDKCNL LEGEPREFVE NSECIQCHPE CLPQAMNITC TGRGPDNCIQ CAHYIDGPHC

VKTCPAGVMG ENNTLVWKYA DAGHVCHLCH PNCTYGCTGP GLEGCPT

 

– 在稳定的HEK293细胞中产生无血清

– 从培养上清液中纯化

纯化：

通过亲和色谱和凝胶过滤

配方：

液体在20毫摩尔三，200毫摩尔氯化钠，pH7.0

浓度：

200微克/毫升

纯度：

>95% reduced SDS-PAGE

MW 66 kDa

特性：

具有特异性抗体的免疫印迹

活性：

在抗体结合中进行测试

稳定性：

在-12°C下至少70个月，避免反复冻融循环

规格：

50 微克 100 微克 1000 微克

货号：

hEGFRVIII50  hEGFRVIII100  hEGFRVIII1000

用途：

实验室试剂 – 不得用作诊断产品或用于人类给药或用于任何药物目的

重组仓鼠Plbd2说明书

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重组仓鼠Plbd2说明书

描述：

Synonyms Plbl2, Plb2

 

来源：

– 中国仓鼠Plbd2的原始全长DNA序列; aa 序列 L38-D585：

 

LPTQGPGRRRQNLDPPVSRVRSVLLDAASGQLRLVDGIHPYAVAWANLTNAIRET

GWAYLDLGTNGSYNDSLQAYAAGVVEASVSEELIYMHWMNTMVNYCGPFEYEVGY

CEKLKSFLEINLEWMQREMELSQDSPYWHQVRLTLLQLKGLEDSYEGRLTFPTGR

FTIKPLGFLLLQIAGDLEDLEQALNKTSTKLSLGSGSCSAIIKLLPGARDLLVAH

NTWNSYQNMLRIIKKYQLQFRQGPQEAYPLIAGNNLVFSSYPGTIFSGDDFYILG

SGLVTLETTIGNKNPALWKYVQPQGCVLEWIRNIVANRLALDGATWADIFKQFNS

GTYNNQWMIVDYKAFIPNGPSPGSRVLTILEQIPGMVVVADKTEDLYKTTYWASY

NIPFFEIVFNASGLQDLVAQYGDWFSYTKNPRAQIFQRDQSLVEDMNSMVRLIRY

NNFLHDPLSLCEACIPKPNAENAISARSDLNPANGSYPFQALYQRPHGGIDVKVT

SFSLAKRMSMLAASGPTWDQLPPFQWSLSPFRSMLHMGQPDLWTFSPISVPWD

 

– 在稳定的HEK293细胞中产生无血清

– 从培养上清液中纯化

纯化：

亲和色谱

配方：

PBS液体，pH 7.4

浓度：

1000微克/毫升

纯度：

>95% 非还原 SDS-PAGE

MW 66， 40， 28 kDa

特性：

具有特异性抗体的免疫印迹，MS分析

活性：

在抗体结合中进行测试

稳定性：

在-12°C下至少70个月，避免反复冻融循环

规格：

50 微克 100 微克 1000 微克

货号：

hPlbd2 50  hPlbd2 100  hPlbd 1000

用途：

实验室试剂 – 不得用作诊断产品或用于人类给药或用于任何药物目的


重组小鼠Plbd2说明书

发表于由

重组小鼠Plbd2说明书

 

描述：

Synonyms Plbl2, Plb2

来源：

– 小鼠Plbd2的原始全长DNA序列; aa 序列 L47-D594：

 

LPTLGPGWQRQNPD PPVSRTRSLL LDAASGQLRL EDGFHPDAVA WANLTN AIRETGWAYLDLST NGRYNDSLQA YAAGVVEASV SEELIYMHWM NTVVNY

CGPFEYEVGYCEKL KNFLEANLEW MQREMELNPD SPYWHQVRLT LLQLKG

LEDSYEGRLTFPTG RFTIKPLGFL LLQISGDLED LEPALNKT N T KPSLGS

GSCSALIKLLPGGH DLLVAHNTWN

SYQNMLRIIK KYRLQFREGP QEEYPL

VAGNNLVFSSYPGT IFSGDDFYIL GSGLVTLETT IGNKNPALWK YVQPQG

CVLEWIRNVVANRL ALDGATWADV FKRFNSGTYN NQWMIVDYKA FLPNGP

SPGSRVLTILEQIP GMVVVADKTA ELYKTTYWAS YNIPYFETVF NASGLQ

ALVAQYGDWFSYTK NPRAKIFQRD QSLVEDMDAM VRLMRYNDFL HDPLSL

CEACNPKPNAENAI SARSDLNPAN GSYPFQALHQ RAHGGIDVKV TSFTLA

KYMSMLAASGPTWD QCPPFQWSKS PFHSMLHMGQ PDLWMFSPIR VPWD

 

– 在稳定的HEK293细胞中产生无血清

– 从培养上清液中纯化

纯化：

亲和色谱

配方：

PBS液体，pH 7.4

浓度：

1000微克/毫升

纯度：

>95% 非还原 SDS-PAGE

MW 66，40，28 kDa

特性：

具有特异性抗体的免疫印迹，MS分析

活性：

在抗体结合中进行测试

稳定性：

在-12°C下至少70个月，避免反复冻融循环

规格：

50 微克 100 微克 1000 微克

货号：

mPlbd2 50  mPlbd2 100  mPlbd 1000

用途：

实验室试剂 – 不得用作诊断产品或用于人类给药或用于

任何药物目的

avidity bulk BirA说明书

发表于由

 

 

avidity bulk BirA说明书

bulk BirA-大容量BirA：BirA生物素蛋白连接酶大容量反应试剂盒，980.00美元

 

 

BirA生物素蛋白连接酶以高效且有针对性的方式，通过ATP中间体（生物素5'-腺苷酸）将d-生物素共价添加至生物素受体肽/蛋白质。该试剂盒包含300 µg BirA酶，用于需要大规模反应或在工作中更频繁地使用BirA生物素化反应的人。

请注意：我们强烈建议使用AviTag氨基酸序列，而不是其他生物素肽序列。BirA酶以2倍于天然底物（BCCP）的反应速率对AviTag序列进行生物素化处理，并且比使用中的其他肽序列高出一个数量级或更多。与其他肽序列的生物素化处理相比，AviTag™需要较少的酶量和较短的孵育时间，从而大限度地减少了与蛋白酶和蛋白质不稳定性相关的辅助问题。

 

产品信息

套件提供为：

  • 十（10）个小瓶，每瓶10 µL 3mg / mL BirA生物素-蛋白质连接酶（总共300 µg）
  • 十（10）个小瓶，每个1.5 mL BiomixA（0.5 M Bicine缓冲溶液，pH 8.3）
  • 十（10）个小瓶，每个1.5 mL BiomixB（100 mM ATP，100 mM Mg2 +乙酸盐，500 µM d-生物素）
  • 十（10）个小瓶，每个额外的BIO-200（500 µM d-生物素）1.5 mL

BirA生物素蛋白连接酶（EC 6.3.4.15）通过ATP中间体（生物素5'-腺苷酸）以高效且有针对性的方式将d-生物素共价添加到生物素受体肽/蛋白质上。酶促生物素化蛋白的下游应用是多种，重要和强大的。通常利用*的生物素-亲和素/链霉亲和素相互作用来进行亲和层析或将蛋白质固定在表面或底物上。通过抗生物素抗体或抗生物素蛋白/链霉亲和素-报告酶偶联物（-HRP，-碱性磷酸酶）或荧光探针进行蛋白质检测成为可能。生物素化的MHC分子的多聚体形式是免疫生物学中流行的工具。

当与我们的AviTag™生物素受体肽氨基酸序列结合使用时，生物素化的发生率是自然大肠杆菌BCCP底物的两倍，并且比其他肽序列的生物素化高出一个数量级或更多。因此，与其他可用序列相比，AviTag™序列需要较少的BirA酶和较短的孵育时间即可完成生物素化反应。如果需要考虑蛋白质的不稳定性或蛋白酶活性，这对于下游的成功可能很重要。

我们的BirA酶是野生型大肠杆菌，由birA基因编码，并通过传统方法纯化至纯度超过99％。

该酶的其他名称包括：生物素连接酶；生物素操纵子阻遏蛋白 birA; 生物素全酶合成酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；生物素-[乙酰-CoA-羧化酶]连接酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；生物素：脱羧羧化酶连接酶；生物素全酶合成酶；HCS。

 

 

 

 

 

简并引物设计方法（实际操作步骤）

发表于由

http://www.genecool.com/?fromuid=102401

自己做过一些简并引物，现将我利用生物信息学资源设计简并引物的各个步骤作一个总结，各位战友可将各自的心得体会写下，以便大家交流！！！

一、利用ncbi搜索不同物种中同一目的基因的蛋白或cDNA编码的氨基酸序列
因为密码子的关系，不同的核酸序列可能表达的氨基酸序列是相同的，所以氨基酸序列才是真正保守的。首先利用NCBI的Entrez检索系统，查找到一条相关序列即可。随后利用这一序列使用BLASTp（通过蛋白查蛋白），在整个Nr数据库中中查找与之相似的氨基酸序列。
二、对所找到的序列进行多序列比对
将搜索到的同一基因的不同氨基酸序列进行多序列比对，可选工具有Clustal W，也可在线分析[url][/url]http://www.ebi.ac.uk/clustalw/ 。其结果入下图所示,所有序列的共有部分将会显示出来。“*”表示保守，“：”表示次保守。

三、确定合适的保守区域
设计简并引物至少需要上下游各有一个保守区域，且两个保守区域相距50～ 400个aa为宜，使得pcr产物在150~1200bp之间，zui重要的是每一个保守区域至少有6个aa残基，因为每条引物至少18bp左右。若比对结果保守性不是很强很可能找不到6个aa的保守区域，这时可以根据物种的亲缘关系，选择亲缘相近的物种进行二次比对，若保守性仍达不到要求，则需进行三次比对。总之，究竟要选多少序列来比对，要根据前一次比对的结果反复调整。zui终目的就是有两个6个aa且两者间距离合适的保守区域。
四、利用软件设计引物
当得到保守区域后，就可以利用专业的软件来设计引物了，其中pp5支持简并引物的设计（关于其的使用请见笔者的另一个帖子http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=8798113&sty=1），将参与多序列比对的序列中的任一条导入pp5中，再将其翻译成核苷酸序列，有密码子简并性，其结果是有n多条彼此只相差以个核苷酸的序列群，该群可用一条有简并性的核苷酸链来表示（其中R＝A／G，Y＝C／T，M＝A／C，K＝G／T，S＝C／G，W＝ A／T，H＝ A／C／T，B＝ C／G／T，V＝A／C／G， D＝A/G /T,N=A／C／G/T），该具有简并性的核苷酸链必然包含上一步中找到的氨基酸保守区域的对应部分，在pp5中修改参数，令其在两个距离合适的保守的nt区域内寻找引物对，总之要保证上下游引物都落在该简并链的保守区域内，结果会有数对，分数越高越好。
五、对引物的修饰
若得到的引物为：
5-NAGSGNGCDTTANCABK-3
则其简并度＝4×2×4×3×4×3×2=2304，很明显该条引物的简并度多高不利于pcr。我们可以通过用次黄嘌呤代替N（因为次黄嘌呤能很好的和4种碱基配对）和根据物种密码子偏好这两种方法来降低简并度（有个查密码子偏好的数据库我以前发过大家搜索一下把）。
zui后，这样子设计出来简并引物对，适用于用于比对的氨基酸序列所属物种及与这些物种分类地位相同的其他物种。

avidity BirA 生物素说明书

发表于由

avidity BirA 生物素说明书

Bulk BirA – Bulk BirA：BirA 生物素-蛋白质连接酶批量反应试剂盒，980.00 美元

 

BirA 生物素-蛋白质连接酶通过 ATP 中间体（生物素 5'-腺苷酸）以高效和有针对性的方式将 d-生物素共价添加到生物素受体肽/蛋白质上。该试剂盒包含 300 µg BirA 酶，适用于需要更大规模反应或在工作中更频繁使用 BirA 生物素化反应的人员。

请注意：我们强烈建议使用 AviTag 氨基酸序列而不是其他生物素化肽序列。BirA 酶以 2 倍于天然底物 (BCCP) 的反应速率对 AviTag 序列进行生物素化，并且与使用的其他肽序列相比，其反应速率可达到一个数量级或更高。与其他多肽生物素化序列相比，AviTag™ 需要更少量的酶和更短的孵育时间，从而最大限度地减少与蛋白酶和蛋白质不稳定性相关的辅助问题。

 

产品信息

套件作为：

  • 十 (10) 瓶 10 µL，每瓶 3mg/mL BirA 生物素-蛋白质连接酶（总共 300 µg）
  • 十 (10) 个小瓶，每瓶 1.5 mL BiomixA（0.5 M bicine 缓冲溶液，pH 8.3）
  • 十 (10) 瓶每瓶 1.5 mL BiomixB（100 mM ATP、100 mM Mg2+乙酸盐、500 µM d-生物素）
  • 十 (10) 个 1.5 mL 小瓶，每个额外的 BIO-200（500 µM d-生物素）

BirA 生物素-蛋白质连接酶 (EC 6.3.4.15) 通过 ATP 中间体（生物素 5'-腺苷酸）以高效且有针对性的方式将 d-生物素与生物素受体肽/蛋白质共价添加。酶促生物素化蛋白质的下游应用是多种多样的、重要的和强大的。生物素-亲和素/链霉亲和素相互作用经常被用于亲和层析或蛋白质固定在表面或底物上。通过抗生物素抗体或亲和素/链霉亲和素-报告酶偶联物（-HRP、-碱性磷酸酶）或荧光探针进行蛋白质检测成为可能。生物素化 MHC 分子的多聚体形式是免疫生物学中的常用工具。

当与我们的 AviTag™ 生物素受体肽氨基酸序列结合使用时，生物素化发生的速度是天然大肠杆菌 BCCP 底物的两倍，与其他肽序列的生物素化相比，其发生率高出一个数量级或更多。因此，与其他可用序列相比，AviTag™ 序列需要更少的 BirA 酶和更短的孵育时间来完成生物素化。如果蛋白质不稳定性或蛋白酶活性是一个问题，这可能对下游的成功很重要。

我们的 BirA 酶是大肠杆菌野生型，由 birA 基因编码，并通过传统方法纯化至 99% 以上的纯度。

这种酶的其他名称包括：生物素连接酶；生物素操纵子阻遏蛋白；比拉; 生物素全酶合成酶；生物素-[乙酰辅酶A羧化酶]合成酶；生物素-[乙酰辅酶A-羧化酶]连接酶；生物素-[乙酰辅酶A羧化酶]合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；生物素：脱羧酶连接酶；生物素全酶合成酶；HCS。