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细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒说明书

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细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒说明书

产品详情

货号

规格

价格

78EA10010-100T

100T

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产品描述

细胞周期（cell cycle）是指连续分裂的细胞从一次分裂完成开始到下次分裂为止的全过程，分为间期和分裂期（M期），细胞间期又分为休眠期（G0期）,DNA合成前期（G1期），DNA合成期（S期），DNA合成后期（G2期）整个周期可以表示为：G0-G1-S-G2-M。

本公司生产的细胞周期检测是通过经典的碘化丙啶染色色 (Propidium iodide staining，PI staining)方法进行周期分析的检测试剂盒。PI是一种DNA的荧光染料，可以结合双链DNA产生荧光，其荧光强度与DNA的含量成正比。经碘化丙啶染色后假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。利用流式细胞仪进行荧光分析从而对DNA进行定量，实现细胞周期检测。

产品组成

本试剂盒常用于贴壁细胞或者悬浮细胞的培养，如果检测对象为组织样品，必须消化成单个细胞后在进行染色检测，规格为50T，每T可检测的样本的细胞数量在10-100万之间。

名称

规格

保存条件

染色缓冲液

25 mL

-20℃

碘化丙啶染色液(20X)

1.25 mL

-20℃

RNase A (50X)

0.5 mL

-20℃

运输与保存

冰袋运输，-20℃保存一年。

实验步骤

1. 细胞样品的准备：

a. 对于贴壁细胞：收集培养液上清，PBS润洗细胞一遍，胰酶消化细胞，加入前面收集的培养液终止消化，得到的细胞悬液1000g离心5min收集细胞沉淀备用。

b. 对于悬浮细胞：1000g左右离心3-5 min，沉淀细胞。

（如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力）

2.细胞固定：

（1）向步骤1收集得到的沉淀中加入300 μL预冷的PBS，轻柔吹打混匀，轻柔涡旋的过程中滴加700 μL预冷的无水乙醇，最后于4℃固定30 min或更长时间。通常固定2 h或以上更能保证染色效果，固定12-24h可能效果更佳。

（2）1000g左右离心5 min去除固定液，预冷PBS清洗一遍后再次离心，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

3. 细胞染色：

（1）参考下表配制碘化丙啶染色液（配置好的碘化丙啶染色液4℃保存，宜当日内使用）：

名称

1个样品

染色缓冲液

0.5 mL

碘化丙啶染色液(20X)

25 μL

RNase A (50X)

10 μL

总体积

0.535 mL

（2）每个样品中加入0.5 mL的碘化丙啶染色液缓慢并充分重悬细胞沉淀， 37ºC避光孵育30min。随后可以4ºC或冰浴避光存放。染色完成后宜在24 h内完成流式检测。

4.流式检测分析：检测激发波长为488 nm处红色荧光，用流式细胞仪对DNA含量进行分析，确定细胞周期变化情况。

注意事项

（1）需自备PBS和70%乙醇，整个过程避光操作。

（2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套。

（3）本产品仅作科研用途！

Zytomed MSK123-05说明书

发表于由

 

Zytomed Systems GmbH开发和分销抗体和试剂，重点是免疫组织化学以及原位杂交试剂。我们的客户包括诊断临床研究所，制药行业和研究实验室，我们信赖我们的服务和的认证产品质量。

 

Zytomed MSK123-05说明书

Mouse anti-p16INK4a, Clone JC2, CE/IVD certified

 

小鼠抗p16 INK4a，克隆JC2，CE / IVD认证

 

p16 INK4a，也称为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A，由CDKN2A基因编码。它通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶4和6（CDK4和CDK6），抑制视网膜母细胞瘤蛋白（Rb）的磷酸化，从而阻碍细胞周期的释放，从而作为肿瘤抑制因子，减缓细胞周期G1期至S期的进展。转录因子E2F，促进DNA合成必需的靶基因的转录。

 

突变以及甲基化状态的改变可以改变CDKN2A基因的表达，导致肿瘤抑制因子p16 INK4a的活性降低或甚至*丧失功能。像这样的改变通常作为实体瘤发病过程中的早期事件发生，并且与多种癌症（例如黑素瘤或胰腺癌，胃癌，食道癌，肺癌，宫颈癌，喉癌和口咽癌）的风险增加相关。

抗p16 INK4a克隆JC2已在我们的质量保证实验室以及独立的病理学实验室中使用不同的手动和自动化方法和方案进行了广泛测试。结果非常令人信服，可靠且可重复。
该抗体被设计用于蛋白质p16 INK4a在福尔马林固定，石蜡包埋的组织切片中的特异性定位。抗p16 INK4a抗体用于体外诊断用途。

 

p16 INK4a检测宫颈上皮内瘤变CIN3（小鼠抗p16 INK4a，克隆JC2，MSK123-05,1：50; EDTA pH 9,0; ZytoChem Plus（HRP）聚合物试剂盒，POLHRP-100; DAB高对比度，DAB5000PLUS） 。

 

制品

一抗

产品 货号 量 状态
p16 INK4a MSK123-05 0.5毫升 CE / IVD
p16 INK4a MSG123 6毫升 CE / IVD

 

 

 

 

ImmuQuest公司介绍

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ImmuQuest公司介绍

简要描述：Immuquest公司是英国一家主要提供细胞周期、核相关、干细胞分化以及肿瘤标志物等相关抗体的公司。

详细介绍

产品咨询

公司：www.immuquest.com

Immuquest公司是英国一家主要提供细胞周期、核相关、干细胞分化以及肿瘤标志物等相关抗体的公司。

glixxlabs细胞周期产品简介

发表于由

glixxlabs细胞周期产品简介

 

细胞周期

细胞周期 或 细胞分裂周期 是一系列发生在事件的 细胞 导致其 分裂 和其DNA（重复DNA复制），以产生两个子细胞。在 缺乏细胞核的细菌中， 细胞周期分为B，C和D期。B期从细胞分裂结束到DNA复制开始。DNA复制发生在C期。D期是指DNA复制结束与细菌细胞分裂成两个子细胞之间的阶段。在具有核的细胞中，如在 真核生物中 ，细胞周期也分为三个阶段： 相间期， 有丝分裂 （M）期和 胞质分裂。在相间期，细胞生长，积累有丝分裂所需的营养，为细胞分裂做好准备并复制其DNA。在有丝分裂阶段，染色体分离。在最后阶段，胞质分裂，染色体和细胞质分成两个新的子细胞。为了确保正确分割细胞，有一些称为细胞周期检查点的控制机制 。

 

细胞分裂周期是一个重要的过程，通过这个过程，单细胞 受精卵 发育为成熟的生物体，并且  是更新头发， 皮肤， 血细胞和一些 内部器官的过程。细胞分裂后，每个子细胞开始 新周期的 中间阶段。尽管相间的各个阶段通常在形态上是无法区分的，但是细胞周期的每个阶段都有一组*的专门的生化过程，这些过程为细胞分裂的启动做好了准备。

 

MEK-016

逆苯二氮卓激动剂

 

NVP-VID400

25-羟基维生素D（3）-24-羟化酶（24-羟化酶）的特异性抑制剂

细胞周期检测试剂盒

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细胞周期检测试剂盒

  • 产品特性
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  • Q&A
  • 参考文献

细胞周期检测试剂盒细胞周期检测试剂盒

Enzo Life Sciences的CELLESTIAL® 系列产品涵盖了广泛应用于活细胞分析的荧光分子探针，用于要求严格的成像应用，如共聚焦显微镜、流式细胞仪和高内涵筛选（HCS），具有需要一致性和可重复性。

NUCLEAR-ID® Green （绿色荧光）和GFP-CERTIFIED® NUCLEAR-ID®（红色荧光）两款周期分析试剂盒，为通过流式细胞术进行细胞周期进程的诱导和抑制研究提供了一种便捷的方法，且细胞周期检测结果不受培养时间、温度、染料和细胞密度影响。可以用于以下方面：

（1）确定给定样品处于Ｇ0/Ｇ1，Ｓ和Ｇ2/Ｍ 期细胞的百分比，以及细胞凋亡之前定量亚Ｇ1期的百分比；

（2）正常细胞系和表现出多倍性细胞系的活细胞、透性化及固定细胞的 DNA 研究。

本试剂盒可用于约100次的流式细胞仪检测。使用 Nocodazole 诺考达唑处理的细胞作为对照以检测细胞周期动力学的变化。活细胞研究也可应用于细胞 DNA 含量的测定、细胞周期增长模式变化的检测、细胞凋亡监测，以及评估肿瘤细胞变化和抑制基因机制。



◆NUCLEAR-ID® Green cell cycle kit

ENZ-51014-100

本试剂盒中荧光染料为绿色。不适用于含绿色荧光蛋白或用 FITC 等绿色染料标记的细胞。

 

●　应用：流式细胞仪，荧光显微镜检测

●　样品类型：正常细胞系和表现出多倍性细胞系，活细胞、透性化细胞及固定细胞均可

●　储存温度： -20°C短期保存，-80°C长期保存

●　试剂盒组分：NUCLEAR-ID® Green Cell Cycle Detection Reagent, 100 µL

●　试剂盒组分：Nocodazole Control, 10 µL

●　试剂盒组分：10×Assay Buffer, 15 mL

特点


●　染色方法简便，加入染料后直接通过流式细胞仪分析（100 tests）

●　激发光波长 488 nm，发射光波长 530 nm，显示为绿色荧光

●　不需要细胞打孔或 RNA 酶处理

●　结果不受细胞周期培养时间、温度、染料和细胞密度影响

●　从活的或固定细胞中读取 DNA 内容信息

●　监测由药物治疗或其他干扰引起的细胞周期动力学的变化采用大范围的细胞密度进行性能验证

◆NUCLEAR-ID® Red cell cycle kit (GFP-CERTIFIED®)

ENZ-51008-100

本试剂盒中荧光染料为红色。对于含绿色荧光蛋白或用FITC等绿色染料标记的细胞同样适用。

 

●　应用：流式细胞仪，荧光显微镜检测

●　样品类型：正常细胞系和表现出多倍性细胞系，活细胞、透性化细胞及固定细胞均可

●　储存温度： -20°C短期保存，-80°C长期保存

●　试剂盒组分：NUCLEAR-ID® Red Cell Cycle Detection Reagent, 200 µL

●　试剂盒组分：Nocodazole Control, 10 µL

●　试剂盒组分：10×Assay Buffer, 15 mL



特点

●　可检测活细胞，固定细胞和透化的细胞中 DNA 含量信息的完整试剂盒

●　稳定且高纯度的红色荧光染料

●　采用不同细胞密度进行性能验证

●　无需 RNase 处理

●　可检测药物处理或者其他因素引起的细胞周期变化

●　无需 UV 激发

●　无光漂白效应

●　可与其他探针与染料一同使用

●　制造严格、消除非特异性检测伪影

●　兼容 GFP 绿色荧光蛋白及 FITC



细胞周期检测试剂盒

Figure 1: 使用结构化照明方法，绿色荧光蛋白表达（GFP表达）线粒体和细胞核之间的空间关系的三维重建


细胞周期检测试剂盒

Figure 2: Drug treatments with live cells inhibit cell cycle progression at different phases.

活细胞药物治疗抑制不同阶段的细胞周期进程。


细胞周期检测试剂盒

NUCLEAR-ID® Red DNA Stain 与其他染料的比较

 


实验操作

A. 用NUCLEAR-ID® 红色染料进行细胞染色后，使用流式细胞仪进行细胞周期 DNA 分析


1.　使用（或不使用）实验化合物处理细胞。试管中悬浮细胞液浓度低于5×105 / mL。

2.　选择介质或普通细胞培养缓冲液与 NUCLEAR-ID® 红色 DNA 染色溶液混合。

3.　推荐使用 NUCLEAR-ID® 红色 DNA 染色溶液的250倍至500倍稀释液进行活细胞周期 DNA 分析（终浓度分别为40 μM至20 μM）。

4.　将细胞重悬于 0.5 mL 新稀释的染色溶液中。

5.　轻轻混合后，室温或37℃下孵育15-30分钟。

6.　直接用流式细胞仪分析细胞而无需进一步处理或洗涤。

7.　488 nm 激发激光分析样品使用流式细胞仪 PerCPCy5.5 或 FL3 通道检测。对于 633 nm 激发，选用适当的收集过滤器 > 700 nm，FL4 

      或 FL5，APC-Cy7 通道。

 


B. 经NUCLEAR-ID® 红色染料染色的活细胞用荧光/共聚焦显微镜观察细胞核变化


1.　贴壁细胞：在含有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养贴壁细胞。当细胞达到所需的数量时，小心地除去培养基并稀释到（~100 μL）2000

      倍至 4000 倍（在选择培养基或缓冲液中）使 NUCLEAR-ID® 红色 DNA 染料能够（终浓度分别为 5.0 μM 至 2.5 μM）覆盖到单层细胞。

      悬浮细胞：室温（RT）下以 400× 离心5分钟获得细胞悬浮液。小心吸除上清液，并进行 2000-4000 倍稀释（在选择培养基或缓冲液中）

      使 NUCLEAR-ID® 红色 DNA 染料能够（终浓度分别为 5.0 μM 至 2.5 μM）覆盖到单层细胞。

2.　样品避光保存，并在37°C孵化15-30分钟。

3.　用 100 μL 缓冲液（如 PBS）洗涤细胞。去除多余的缓冲液，将盖玻片放在载玻片上。使用广角荧光或共焦显微镜（推荐放大 60 倍）观察染色

      后的细胞。使用标准罗丹明或德克萨斯红色过滤器集成像系统。

相关产品资料请点击下载：活细胞荧光分析 Ver.3

※ 本页面产品仅供研究用。研究以外不可使用。


相关产品：

NUCLEAR-ID® Red DNA stain

NUCLEAR-ID® DNA 红色染料细胞渗透性 DNA 染色，可广泛应用于高效液相色谱（HPLC）≥93％，流式细胞仪，荧光检测

产品编号 包装
ENZ-51014-100 200 µL

     

参考文献

1.

Growth-promoting and tumorigenic activity of c-Myc is suppressed by Hhex: V. Marfil, et al.; Oncogene 34, 3011 (2015), Abstract;

2.

Epigenetic regulation of planarian stem cells by the SET1/MLL family of histone methyltransferases: A. Hubert, et al.; Epigenetics 8, 79 (2013), Application(s): Cell cycle analysis of stem cells from freshwater planarian by flow cytometry, Abstract; Full Text

3.

Gene-specific factors determine mitotic expression and bookmarking via alternate regulatory elements: P. Arampatzi, et al.; Nucleic Acids Res. 41, 2202 (2013), Application(s): Fluorescence imaging of nuclear DNA of human cancer cells, Abstract; Full Text

4.

An intact retinoblastoma protein-binding site in Merkel cell polyomavirus large T antigen is required for promoting growth of Merkel cell carcinoma cells: R. Houben, et al.; Int. J. Cancer 130, 847 (2012), Application(s): Cell cycle analysis of cancer cell lines by flow cytometry, Abstract; Full Text

5.

Gomisin A enhances tumor necrosis factor-α-induced G1 cell cycle arrest via signal transducer and activator of transcription 1-mediated phosphorylation of retinoblastoma protein: P. Waiwut, et al.; Biol. Pharm. Bull. 35, 1997 (2012), Application(s): Cell cycle analysis of HeLa cells by flow cytometry, Abstract; Full Text

6.

A cell-permanent dye for cell cycle analysis by flow and laser-scanning microplatecytometry: Y.J. Xiang, et al.; Nat. Methods 6, an2 (2009), Abstract;

一般参考文献

1.

DNA measurement and cell cycle analysis by flow cytometry: R. Nunez; Curr. Issues Mol. Biol. 3, 67 (2001), Abstract;

2.

Methods in Cell Biology, Flow Cytometry: Z. Darzynkiewicz, H.A. Crissman and J.P. Robinson (editors and co-authors); Vol. I and II, (1994), Book,

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
ENZ-51014-100 Nuclear-ID® Green cell cycle kit for flow cytometry 
细胞周期检测试剂盒（绿色荧光）（流式）		 1 Kit – –
ENZ-51008-100 Nuclear-ID® Red cell cycle kit (GFP-Certified®) for flow cytometry 
细胞核检测试剂盒（红色荧光）（GFP细胞）（荧光显微镜）		 1 Kit – –
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