LabAssay™ NEFA LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒

发表于2024-09-28由上海金畔生物科技有限公司

LabAssay™ NEFA
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LabAssay™ NEFA

LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒

在血液中NEFA（Non-esterified Fatty Acid：游离脂肪酸）与白蛋白结合，被转运至外周组织，成为外周组织重要的能源来源。游离脂肪酸的浓度通过脂肪组织释放、外周组织消耗以及肝脏摄取进行调节。

本产品采用了基于酰基辅酶A合成酶（ACS）、酰基辅酶A氧化酶（ACOD）和3-甲基-N-乙基-N-（β-羟乙基）-苯胺（MEHA）的蓝紫色显色酶法。不可用于体外诊断。

◆检测原理

样品中的游离脂肪酸（NEFA）在酰基辅酶A（Acyl-CoA）和腺苷- 5'-三磷酸二钠（ATP）存在下，通过酰基辅酶A合成酶（ACS）的作用，生成酰基辅酶A、AMP以及焦磷酸（PPi）。生成的酰基辅酶A在酰基辅酶A氧化酶（ACOD）的作用下被氧化，同时生成2,3-反式烯酰辅酶A（2,3-trans-Enoyl-CoA）和过氧化氢。生成的过氧化氢在过氧化物酶（POD）的作用下，与3-甲基-N-乙基-N-（β-羟乙基）-苯胺（MEHA）和4-氨基安替比林（4-Aminoantipyrine）进行定量氧化缩合，生成蓝紫色色素。通过测定这种蓝紫色的吸光度，即可计算样品中的NEFA浓度。

LabAssay™ NEFA LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒

◆性能

●　标准曲线范围：0.4～1.97 mEq/L

●　检测时间：约 20 min

●　样品：血清、血浆（小鼠、大鼠、人、犬、猫）

●　所需样品量：4 μL

●　测定波长：550 nm

◆试剂盒组成

１．显色剂A——10 mL用×4瓶

２．显色剂A溶解液——45 mL×1瓶

３．显色剂B——20 mL用×4瓶

４．显色剂B溶解液——90 mL×1瓶

５．标准溶液（油酸1 mEq/L）——7 mL×1瓶

５． ※ 油酸1 mEq/L=1 mmol

◆标准曲线示例

◆检测操作方法

微孔板法

按下表条件进行反应。

No.	标准溶液	蒸馏水或去离子水	样品量	浓度
1	80 µL	120 µL	4 μL	0.40 mEq/L
2	120 µL	80 µL	4 μL	0.60 mEq/L
3	160 µL	40 µL	4 μL	0.80 mEq/L
4	未经稀释	–	4 μL	1.00 mEq/L
5	未经稀释	–	8 μL	1.97 mEq/L^*1

*1：样品量通常是4 μL, 但在这里使用了8 μL。NEFA的浓度需要根据上表校正。

	Test	标准	空白对照	样品盲检^＊２
显色试剂 A	80 μL	80 μL	80 μL	80 μL
待测物	血清 4 μL	标准溶液 4 μL	蒸馏水或去离子水 4 µL	―
充分混合^＊3、37 ℃加热10 min。
显色试剂 B	160 μL	160 μL	160 μL	160 μL
待测物	―	―	―	血清 4 μL
充分混合^＊3、37 ℃加热10 min。
恢复至室温，在30 min内以空白作为对照，测定样品和标准溶液的吸光度。
550 nm 吸光过滤

*2：普通的样品无需样品盲检。请使用乳糜血清或溶血血清进行测试。

*3：使用板式搅拌机，在600~1000 rpm下搅拌1 min左右。

◆加标回收测试

NEFA的加标回收测试，将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中，n=2。

人样品

人样品	添加量（mEq/L）	测定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
血清样品	–	0.69
	0.4	1.14	0.45	111.80%
	0.61	1.34	0.64	105.70%
	0.78	1.54	0.85	108.50%
	1.01	1.73	1.03	102.30%
血浆（EDTA）样品	–	0.28
	0.4	0.7	0.43	105.30%
	0.61	0.9	0.62	102.50%
	0.78	1.12	0.84	106.80%
	1.01	1.34	1.06	105.40%

小鼠样品

小鼠样品	添加量（mEq/L）	测定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
血清样品	–	0.7
	0.4	1.07	0.37	91.70%
	0.61	1.31	0.61	100.10%
	0.78	1.44	0.74	94.50%
	1.01	1.62	0.92	91.30%
血浆（EDTA）样品	–	0.62
	0.4	0.99	0.37	92.50%
	0.61	1.29	0.68	111.50%
	0.78	1.38	0.77	97.80%
	1.01	1.62	1	99.10%

大鼠样品

大鼠样品	添加量（mEq/L）	测定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
大鼠血清样品	–	0.57
	0.4	1	0.43	106.40%
	0.61	1.21	0.65	106.20%
	0.78	1.4	0.83	106.40%
	1.01	1.57	1.01	99.70%
大鼠血浆（EDTA）样品	–	0.41
	0.4	0.86	0.45	111.50%
	0.61	1.07	0.66	108.50%
	0.78	1.27	0.86	109.50%
	1.01	1.44	1.02	101.40%

培养基样品

样品	添加量（mEq/L）	测定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
50%培养基 +标准品	–	0.03	–	–
	0.374	0.409	0.38	101.60%
	0.683	0.71	0.68	99.60%
	0.829	0.812	0.782	94.40%
	1.013	1.059	1.03	101.70%

◆样品检测示例

人血清样本

测定值（mEq/L）

mean

CV（%）

混合人血清，男性

0.686

0.688

0.687

0.001

0.2

混合人血浆

（K2EDTA），男性

0.354

0.35

※0.352

0.003

0.8

※参考值

20%稀释CD-1（ICR）雄性小鼠正常血清

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）
1	1.119	1.117	1.118	0.001	0.1
2	0.783	0.793	0.788	0.007	0.9
3	0.7	0.731	0.715	0.022	3.1
4	0.795	0.792	0.794	0.002	0.2
5	0.825	0.833	0.829	0.005	0.6

100%CD-1(ICR)雄性小鼠正常血浆（K2EDTA）

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）
1	0.311	0.308	※0.309	0.002	0.6
2	0.319	0.321	※0.320	0.002	0.6
3	0.202	0.208	※0.205	0.004	2
4	0.173	0.185	※0.179	0.008	4.6
5	0.293	0.318	※0.305	0.017	5.6

※参考值

10％稀释雄性Sprague Dawley大鼠正常血清

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）
1	0.3	0.3	※0.300	0	0
2	0.373	0.368	※0.371	0.004	1.1
3	0.301	0.277	※0.289	0.017	5.8
4	0.365	0.364	※0.365	0	0.1
5	0.403	0.362	※0.382	0.029	7.6

※参考值

100％雄性Sprague Dawley大鼠正常血浆（K2EDTA）

样品批次	测定值（mEq/L）		Mean	SD	CV（%）
RAT432145	0.336	0.33	※0.333	0.004	1.2
RAT432146	0.358	0.354	※0.356	0.003	0.8
RAT432147	0.311	0.339	※0.325	0.02	6
RAT432148	0.222	0.214	※0.218	0.005	2.6
RAT432149	0.522	0.508	0.515	0.01	1.9

※参考值

◆样品检测示例

100%雄性比格犬正常血清

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年龄
1	0.654	0.657	0.656	0.0027	0.4	4
2	0.642	0.688	0.665	0.032	4.8	6
3	0.419	0.431	0.425	0.009	2	6
4	0.377	0.383	※0.38	0.0057	1.5	11
5	0.887	0.877	0.882	0.007	0.8	12
6	0.604	0.595	0.599	0.006	1.1	6
7	0.987	1.025	1.006	0.0267	2.7	10
8	0.501	0.51	0.506	0.006	1.2	4

※参考值

100%雄性比格犬正常血浆（EDTA）

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年龄
1	0.44	0.444	0.442	0.0033	0.7	4
2	0.419	0.435	0.427	0.011	2.6	6
3	0.311	0.306	※0.308	0.0037	1.2	10
4	0.47	0.487	0.478	0.0123	2.6	12
5	0.472	0.475	0.473	0.005	1	6
6	0.37	0.364	※0.367	0.0047	1.2	11
7	0.789	0.77	0.78	0.0133	1.7	10
8	0.439	0.384	0.411	0.0387	9.4	12

※参考值

100% 雄性短毛猫正常血清

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年龄
1	0.709	0.726	0.717	0.0117	1.6	3
2	0.628	0.642	0.635	0.01	1.6	3
3	1.004	1.003	1.004	0.0053	0.5	6
4	0.974	0.987	0.981	0.0093	0.9	4
5	0.624	0.649	0.636	0.017	2.7	6
6	1.175	1.212	1.193	0.0267	2.3	6
7	1.086	0.959	1.022	0.0893	8.8	1
8	0.371	0.393	※0.382	0.0157	4.1	1

※参考值

100％雄性短毛猫正常血浆（EDTA）

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年龄
1	1.092	1.107	1.099	0.0103	0.9	0.5
2	0.177	0.172	※0.174	0.0033	2	1
3	0.243	0.24	※0.241	0.0043	1.7	3
4	0.32	0.319	※0.320	0.0067	2.2	0.5
5	0.363	0.354	※0.359	0.006	1.7	3
6	0.206	0.189	※0.197	0.012	6.2	3
7	0.232	0.199	※0.215	0.024	11.1	0.5
8	0.142	0.12	※0.131	0.016	12.3	1

※参考值

◆稀释线性度测试

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※ 产品已更新，旧编号为：294-63601

参考文献

1）	Kobayashi, Y. et al. : J. Pharmacogn. Nat. Prod., online (2015). Effects of Morus alba L. (Mulberry) Leaf Extract in Hypercholesterolemic Mice on Suppression of Cholesterol Synthesis ※小鼠肝组织提取物
2）	Gao, F. et al. : Evid. Based Complement. Alternat. Med., 2015, 801291 (2015).Effect of Keishibukuryogan on Genetic and Dietary Obesity Models ※大鼠肝组织提取物
3）	Ogawa, K. et al. : Reprod. Med. Biol., online (2018). Non-esterified fatty acid-associated ability of follicular fluid to support porcine oocyte maturation and development ※猪卵泡来源卵泡液
4）	Wang, F. et al. : J. Mol. Endocrinol., 52, 133 (2014). LGR4 acts as a link between the peripheral circadian clock and lipid metabolism in liver ※小鼠血浆
5）	Uchida, K. et al. : Exp. Anim., 58, 181 (2009). Hyperlipidemia and hyperinsulinemia in the spontaneous osteoarthritis mouse model, STR/Ort ※小鼠血清

产品列表

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
633-52001	LabAssay™ NEFA LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒	500 tests	–	–

植物来源油

发表于2024-04-10由上海金畔生物科技有限公司

植物来源油

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参考文献

植物来源油

植物油是植物来源的由脂肪酸和甘油化合而成的天然高分子化合物，广泛分布于自然界中。

植物油脂肪含量在99%以上，此外含有丰富的维生素E，少量的钾、钠、钙和微量元素。FUJIFILM Wako可提供芝麻油、葵花籽油、亚麻籽油等多种植物来源油，可用于油脂研究以及不饱和脂肪酸、油漆、橡胶、化妆品等制备的原料。

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

相关油脂研究用产品：

反式脂肪酸标准品

缩水甘油脂肪酸酯标准品

◆植物来源油产品列表

产品列表

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
125-01046	Linseed Oil 亚麻子油	500 mL
150-00276	Olive Oil 橄榄油	500 mL
196-15265	Sunflower Seed Oil 葵花籽油	500 mL
196-15385	Sesame Oil (non roast) 芝麻油	500 mL
101-00125	Jojoba Oil 荷荷巴油	500 mL
107-00122	Jojoba Oil 荷荷巴油	25 mL
036-01605	Cedar Oil 柏木油	500 g
032-01602	Cedar Oil 柏木油	25 g
032-17016	Corn Oil 玉米油	500 mL
034-01586	Castor Oil 蓖麻油	500 mL
014-22305	Avocado Oil 鳄梨油	500 mL
010-22302	Avocado Oil 鳄梨油	25 mL
013-22375	Almond Oil 杏仁油	500 mL
028-05162	Bergamot Oil 香柠檬油	25 mL
030-03565	Clove Oil 丁香油	500 g
036-03562	Clove Oil 丁香油	25 g
031-21175	Cottonseed Oil 棉籽油	500 mL
037-21172	Cottonseed Oil 棉籽油	25 mL
036-20905	Coconut Oil 椰子油	500 g
032-20902	Coconut Oil 椰子油	25 g
052-06165	Eucalyptus Oil 桉叶油	500 mL
058-06162	Eucalyptus Oil 桉叶油	25 mL
061-03495	Fennel Oil 小茴香油	500 mL
067-03492	Fennel Oil 小茴香油	25 mL
073-05575	Grape Seed Oil 葡萄籽油	500 mL
079-05572	Grape Seed Oil 葡萄籽油	25 mL
130-15985	Meadowfoam Seed Oil 池花籽油	500 mL
136-15982	Meadowfoam Seed Oil 池花籽油	25 mL
132-16045	Macadamia Nut Oil 澳洲坚果油	500 mL
138-16042	Macadamia Nut Oil 澳洲坚果油	25 mL
152-01892	Orange Oil 甜橙油	25 mL
156-01895	Orange Oil 甜橙油	500 mL
182-02375	Rapeseed Oil 菜籽油	500 mL
188-02372	Rapeseed Oil 菜籽油	25 mL
187-02325	Rose Hips Oil 玫瑰果油	500 mL
183-02322	Rose Hips Oil 玫瑰果油	25 mL
190-03776	Soybean Oil 大豆油	500 mL
192-15262	Sunflower Seed Oil 葵花籽油	25 mL
192-15382	Sesame Oil (non roast) 芝麻油	25 mL
195-15372	Safflower Oil 红花油	25 mL
199-15375	Safflower Oil 红花油	500 mL
202-03486	Turpentine Oil 松节油	500 mL

3-MCPD及其脂肪酸酯标准品

发表于2024-04-09由上海金畔生物科技有限公司

3-MCPD及其脂肪酸酯标准品

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3-MCPD及其脂肪酸酯标准品

　　３-氯-１,２-丙醇（３-MCPD）是在食品的加工和储藏过程中所形成的一种氯丙醇化合物。３-MCPD 的其主要污染来源于酸水解植物蛋白（HVP）以及食用油的精制中的副产品，是公认的食品污染物，具有潜在致癌性。

　　３-MCPD 可作为一个单独的化合物，也可与脂肪酸发生酯化反应。３-MCPD 酯是一种稳定的中间体，由脂肪（油）转换成３-MCPD 的一种副产物。研究表明３-MCPD 酯存在于很多加工和未加工的食品以及食品调料中。一般来说，任何食品和食品调料中单独的３-MCPD 的量都要远远小于由３-MCPD 酯水解出来的３-MCPD 量。

◆相关的国标

　　GB/T 5009.191-2006 食品中氯丙醇含量的测定

　　本标准第一法适用于水解植物蛋白液、调味品、香肠、奶酪、鱼、面粉、淀粉、谷物和面包中３-氯-１２-丙二醇（３-MCPD）含量的测定。

　　第二法适用于酱油、食醋、鸡精、蚝油等调味品、水解植物蛋白液、香肠、方便面调味包等食品中单氯取代的３-氯-１,２-丙二醇（３-MCPD）和２-氯-１３-丙二醇（２-MCPD）以及双氯取代的１３-二氯-２-丙醇（１３-DCP）和２３-氯-１-丙二醇（２３-DCP）含量的测定。

　　第三法适用于酱油、食醋、鸡精、水解植物蛋白液等食品、调味品中３-MCPD、１３-DCP和２３-DCP 含量的测定。

　　GB/T 18782-2002 调味品中３-氯-１,２-丙醇的测定

本标准适用于酱油、酱油粉、酸水解植物蛋白调味液（粉）和其他调味液（粉）中３-氯-１,２-二氯含量的测定。

　　文献：油脂性食品中脂肪酸氯丙醇酯检测方法的研究进展

产品列表

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
031-21511	3-Chloro-1,2-propanediol Dioleate Standard 3 – 氯-1,2 – 丙二醇二油酸脂标准品	100 mg	for Food Analysis	–
037-21471	3-Chloro-1,2-propanediol Dipalmitate Standard 3 – 氯-1,2 – 丙二醇双棕榈酸酯标准品	100 mg	for Food Analysis	–
038-21881	3-Chloro-1,2-propanediol Distearate Standard 3 – 氯-1,2 – 丙二醇二硬脂酸酯标准品	100 mg	for Food Analysis	–

缩水甘油脂肪酸酯标准品

发表于2024-04-09由上海金畔生物科技有限公司

缩水甘油脂肪酸酯标准品

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缩水甘油脂肪酸酯标准品

甘油脂肪酸酯，食用油的生产过程中的一种副产物。当被人体吸收后会转换成一种致癌物质——缩水甘油。

目前，世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）已将缩水甘油归类为“有致癌危险”（第2A组），而缩水甘油脂肪酸酯存在在体量降解成缩水甘油的风险。因此近年来，各国均逐渐提倡减少食物中缩水甘油脂肪酸酯的使用。

FUJIFILM Wako可提供缩水甘油脂肪酸酯标准品。

主要包括以下几种：

　　　1. 油酸缩水甘油酯

　　　2. 亚油酸缩水甘油酯

　　　3. 亚麻酸缩水甘油酯

　　　4. 棕榈酸缩水甘油酯

　　　5. 硬脂酸缩水甘油酯

　　　6. 缩水甘油

缩水甘油脂肪酸酯标准品

从图谱中可看出用GC分析时，峰能完全分开且峰型很好。

产品编号	产品名称	中文名称	包装	CAS	实物图
071-05711	Glycidyl Oleate Standard	油酸缩水甘油酯标准品	100 mg	5431-33-4
078-05721	Glycidyl Linoleate Standard	亚油酸缩水甘油酯标准品	100 mg	24305-63-3
075-05731	Glycidyl Linolenate Standard	亚麻酸缩水甘油酯标准品	100 mg	51554-07-5	–
072-05741	Glycidyl Palmitate Standard	棕榈酸缩水甘油酯标准品	100 mg	7501-44-2
075-05851	Glycidyl Stearate Standard	硬脂酸缩水甘油酯标准品	100mg	7460-84-6
079-05751	Glycidol Standard	缩水甘油标准品	100 mg	556-52-5

点击此处查看相关产品详情：反式脂肪酸研究用试剂

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反式脂肪酸研究用试剂

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反式脂肪酸研究用试剂

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反式脂肪酸研究用试剂

反式脂肪酸存在于人造黄油、起酥油等植氢化油中，以及天然食品中（例如肉类和奶制品）。近年来，由于反式脂肪酸的摄入与心脏病风险之间存在一定关系，人们正在努力预防和改善由过多的脂质摄入引起的肥胖和与生活方式有关的疾病。

FUJIFILM Wako可提供反式脂肪酸分析用内标物及相关脂肪酸酯标准品。

◆反式脂肪酸分析用内标物

目前对于反式脂肪酸的分析有两种方法：分别为美国油脂化学协会AOCS Ce1h-05法和美国官方分析化学师协会AOAC的官方方法AOAC 996.06法。

AOCS法将二十一烷酸甘油三酯（由具有21个碳原子的饱和脂肪酸组成的甘油三酯; C21：0）用作内标物质进行定量；而AOAC将十一碳酸三甘油酯（C11：0）作为内标来定量反式脂肪酸。另外，日本油学会的标准油脂分析方法使用十七烷酸标准品（C17）作为动植物油分析的内标物。

产品编号	产品名称	包装	脂肪酸碳数目	不饱和度
084-08661	Heptadecanoic Acid Standard 十七烷酸标准品	100 mg	17	0
203-18781	Triundecanoin Standard 十一烷酸甘油三酯标准品	100 mg	11	0
200-18791	Tritridecanoin Standard 十三烷酸甘油三酯标准品	100 mg	13	0
203-18801	Triheptadecanoin Standard 十七烷酸甘油三酯标准品	100 mg	17	0
205-18501	Triheneicosanoin Standard 二十一烷酸甘油三酯标准品	100 mg	21	0

◆分析实例

十一烷酸甘油三酯标准品

二十一烷酸甘油三酯标准品

反式脂肪酸研究用试剂

【HPLC条件】

色谱柱：Wakopak^® Navi C18-5 4.6 mmφ x 25 cm

柱温：40℃

流动相：CH₃CN/CHCl₃=75/25

流速：1.0 mL/min

检测器：CoronaCAD

【HPLC条件】

色谱柱：Wakopak^® Navi C18-5 4.6 mmφ x 25 cm

柱温：40℃

流动相：CH₃CN/CHCl₃=55/45

流速：1.0 mL/min

检测器：CoronaCAD

◆脂肪酸酯研究用试剂

饱和脂肪酸甲酯标准品

产品编号	产品名称	包装	脂肪酸碳数目	不饱和度
135-07963	Methyl Palmitate Standard 棕榈酸甲酯标准品	1 g	16	0
139-07961	Methyl Palmitate Standard 棕榈酸甲酯标准品	5 g	16	0
136-07971	Methyl Stearate Standard 硬脂酸甲酯标准品	5 g	18	0
130-17261	Methyl Arachidate Standard 二十烷酸甲酯标准品	100 mg	20	0

单不饱和脂肪酸甲酯标准品

产品编号	产品名称	包装	脂肪酸碳数目	不饱和度
139-08583	Methyl Oleate Standard(9-cis) (C18) 油酸甲酯标准品	1 g	18	1
133-17251	Methyl cis-11-Octadecenoate Standard 顺-11-十八碳烯酸甲酯标准品	100 mg	18	1
137-17271	Methyl cis-11-Eicosenoate Standard 顺-11-二十碳烯酸甲酯标准品	100 mg	20	1
136-17241	Methyl Elaidate Standard 反-9-十八碳烯酸甲酯标准品	100 mg	18	1

亚油酸、α-亚麻酸

产品编号	产品名称	包装	脂肪酸碳数目	不饱和度
125-05821	Linoleic Acid, from Plants 亚油酸	5 g	18	2
123-05822	Linoleic Acid, from Plants 亚油酸	25 g	18	2
122-05831	α-Linolenic Acid, from Plants α-亚麻酸	1 g	18	3

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FAOBlue 可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

发表于2024-04-06由上海金畔生物科技有限公司

FAOBlue
可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

产品特性
相关资料
Q&A
参考文献

可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

FAOBlue

FAOBlue是一款可以通过蓝色荧光可视化脂肪酸分解的共同途径——脂肪酸β-氧化（FAO）的活性的试剂。

通过荧光成像，可以简单地检测出过去难以检测的活细胞中的脂肪酸β-氧化活性。

该产品可广泛应用于对比评估不同细胞种类之间的β-氧化，探索促进或抑制β-氧化活性的化合物，β-氧化相关酶群的基础研究等领域。

※　本产品基于九州大学研究生院药学研究院药物发现化学生物学领域王子田彰夫教授的研究成果，

※　由Funakoshi株式会社商品化并销售。

※　本产品仅供研究使用。

FAOBlue 可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

使用FAOBlue可视化HepG2细胞的FAO活性

添加FAOBlue到HepG2细胞中，观察活细胞成像，可从细胞中观察到蓝色荧光。另一方面，若使用FAO抑制剂进行前处理，则荧光强度明显减少，由此可知，蓝色荧光的强度取决于FAO的活性。

◆何为脂肪酸β-氧化（Fatty acid beta-oxidation; FAO）

脂肪酸是构成细胞的各种脂质的基本要素，与葡萄糖、氨基酸并称为能源。尤其是在葡萄糖不足而饥饿的时候，脂肪酸会分解活跃，产生大量的ATP。虽然脂肪酸根据碳链的长短以及不饱和度的差别而存在不同的种类，但是由于它的分解属于线粒体等细胞器的共同分解途径，因此这种途径被统称为脂肪酸β-氧化（Fatty acid beta-oxidation; FAO）。

脂肪酸β-氧化主要通过4步酶反应——1）脂肪酸β位的氧化，2）β位的水合，3）β位的氧化，4）裂解，被阶段性分解为2个碳原子的短链脂肪酸和作为ATP原料的乙酰CoA。其中生成的2个碳原子的短链脂肪酸再通过同一个循环，以2ⁿ个碳原子的短链脂肪酸重复分解。

研究提出，癌症以及非酒精性肝炎（NASH）等疾病中，脂肪酸β-氧化会出现很大的变动，因此开发检测脂肪酸β-氧化活性的方法备受期待。然而，在活细胞中检测多种酶参与的脂肪酸β-氧化一直以来都十分困难。

FAOBlue是一款新型脂肪酸β-氧化应答型荧光探针，由九州大学研究生院药学研究院、专攻药物发现化学生物学领域的王子田彰夫教授开发。只需将产品添加到培养基中的简单操作，便可以通过荧光观察定量脂肪酸β-氧化活性。

FAOBlue 可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

◆原理

FAOBlue是一种在碳原子数为9的壬酸的碳链末端添加了蓝色荧光色素香豆素衍生物的化合物，此外，通过用乙酰氧基甲基酯保护末端脂肪酸来提高细胞膜透过性。虽然FAOBlue中含有香豆素衍生物，但是在该状态下，它不会在405 nm激发下发出荧光。

FAOBlue 可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

1. 附着在羧基的乙酰氧甲基具有高疏水性，因此FAOBlue可以跨越细胞膜，有效地摄入到细胞中。

2. 通过细胞内的酯水解酶去除乙酰氧基甲酯，转换成游离脂肪酸的形态。

3. 通过脂酰CoA合成酶转换成脂酰CoA，摄入β-氧化途径。

4. 通过β-氧化循环壬酸（C9）按庚酸（C7）、戊酸（C5）、丙酸（C3）的顺序转换，在第四次β-氧化循环的丙酸

4. 被分解时，香豆素衍生物被释放出来。香豆素衍生物在405 nm激发下发出蓝色荧光。

5. 由于游离的香豆素衍生物扩散到整个细胞中，因此通过检测细胞内的蓝色荧光强度，可以实时且定量的评价β-氧

4. 化活性。

※　通过添加肉碱穿梭抑制剂的Etomoxir，有效地抑制了细胞内的荧光上升。

※　该结果证明FAOBlue主要检测线粒体的FAO活性。

◆特点

●　FAOBlue处于消光状态，分解后的游离香豆素衍生物呈现出比分解前更高的荧光强度。

●　添加培养基后，30 min~120 min后便可观察。

●　无需特别操作即可检测β-氧化活性。

●　实例验证能观察多种细胞类型的β-氧化。

●　有抑制药物依赖性β-氧化和因促进而引起的活性变化的成功检测案例。

●　检测波长：激发405 nm/荧光460 nm。

※　注意：

使用共聚焦激光显微镜时，推荐使用405 nm激光激发。如果本试剂在330～380 nm的范围内激发的话，会观察到无关FAO活性的370～450 nm（最大荧光波长410 nm）的荧光。使用荧光显微镜时，为了特异性观察FAO活性，推荐选择激发波长在390～430 nm范围内的激发光滤光片。详情请参考数据实例：FAO特异性吸收光谱、荧光光谱的变化。

◆原著论文

Uchinomiya et. al., Chem. Commun. 56, 3023～3026 (2020) .

”Fluorescence Detection of Metabolic Activity of Fatty Acid Beta Oxidation Pathway in Living Cells.”

◆应用

●　评价各种细胞的β-氧化活性

●　β-氧化相关的基因基础研究

●　抑制或促进β-氧化的化合物的探索等

◆操作方法概况

1. 在HBS中溶解FAOBlue至终浓度为5~20 μM^*1。

1. *1 针对不同的细胞类型，合适的浓度有所差异。建议根据具体实验进行探讨。

2. 去除培养基，用HBS清洗细胞2次。

3. 向细胞添加含有FAOBlue的HBS。

4. 在37°C下培养30 min以上^*2。

1. *2 针对不同的细胞类型，合适的培养时长有所差异。建议根据具体实验进行探讨。

5. 更换培养基后^*3，通过成像观察蓝色荧光（Ex. 405 nm/Em. 430～480 nm）。

1. *3 染色后的培养基更换是非必须的。即使不清洗也可进行观察。

FAOBlue 可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

实验注意点

由于本试剂使用405 nm的激发光，根据不同的观察对象，可能会观察到其自发的荧光。建议同时进行未添加本试剂的阴性对照实验。尤其是在显微镜下观察到点状荧光信号时，可能就是细胞的自发荧光。

◆应用实例

FAO特异性吸收光谱、荧光光谱的变化

FAOBlue以及香豆素衍生物的吸收光谱（左）和荧光光谱（右）。

FAOBlue在通过FAO转换成香豆素衍生物后，吸收最大值由350 nm变为405 nm的长波长。因此，在405 nm的激发条件下，FAOBlue不会发出荧光，只有在通过FAO释放香豆素衍生物时才会发出蓝色荧光。

※　注意：

若使用处于FAOBlue的吸收最大值350 nm左右的光激发，FAOBlue也会发出蓝色荧光（380～450 nm；最大波长400 nm）。若在荧光显微镜中使用普通的DAPI滤光片，将会同时激发未反应的FAOBlue以及FAO反应后的香豆素衍生物。所以在选择滤光片时请格外注意。

FAOBlue 可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

可视化各种细胞类型中的FAO活性

在4种癌细胞中加入FAOBlue，培养一定时间后进行荧光观察。所有细胞都观察到了蓝色荧光，而添加FAO抑制剂etomoxir后荧光显著衰减，由此可知，蓝色荧光是由FAO活性引起的。

FAOBlue 可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

※ 各种细胞的实验条件有所不同。

※ HepG2 : 5 μM, 30 min

※ LNCaP: 20 μM, 120 min

※ HeLa : 20 μM, 120 min

※ A549 : 5 μM, 30 min

观察刺激依赖性β-氧化的变化

向HepG2细胞添加脂质代谢促进剂AICAR^*2（200 μM，3 h）或部分FAO抑制剂ranolazine（200 μM，12 h）进行前处理后，添加FAOBlue（5 μM）培养30 min。进行荧光观察时，可以看到对比对照实验（未处理），AICAR中荧光强度明显增强，ranolazine中荧光强度明显降低。

＊2 AICAR : AMPK（AMP-activated protein kinase）活化剂具有活化脂质代谢的功能。

FAOBlue 可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

药物作用的定量分析

使用FAOBlue可以定量分析药物对FAO的效果。用非酒精性脂肪肝疾病（NAFLD）的候选治疗药ND-630（acetyl-CoA carboxylase inhibitor）前处理HepG2细胞4 h后，添加FAOBlue（5 μM）培养30 min。使用共聚焦激光显微镜评价蓝色荧光强度时，可以观察到依赖于ND-630浓度的荧光强度增加。由此可知，ND-630增强了FAO的活性。

FAOBlue 可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

NASH模型小鼠分析

非酒精性肝炎（NASH）是一种与脂质相关的疾病，已知会降低脂肪分解的速度。向正常小鼠和NASH模型小鼠以口服形式给药增强脂质代谢的bezafibrate后，回收其肝脏制备初代培养肝细胞。向各个细胞加入FAOBlue（5 μM）观察其FAO活性，结果显示，对比正常小鼠来源细胞，NASH模型小鼠来源细胞的FAO活性明显被抑制。另一方面，我们可以看到给药bezafibrate的NASH模型小鼠来源细胞中FAO恢复了活性。

本试剂可用于脂质相关疾病模型中的FAO定量分析。

FAOBlue 可荧光定量活细胞的脂肪酸β-氧化（FAO）活性的试剂

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

相关资料

FAOBlue

产品列表

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
FDV-0033	FAOBlue (Fatty Acid Oxidation Detection Reagent) FAOBlue 脂肪酸氧化检测试剂	0.2 mg

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AssayGenie高灵敏度脂肪酸氧化 (FAO) 检测试剂盒的应用

发表于2024-03-23由上海金畔生物科技有限公司

AssayGenie高灵敏度脂肪酸氧化 (FAO) 检测试剂盒的应用

脂肪酸每碳提供的ATP比葡萄糖等碳水化合物多。在具有高能量需求的组织中，例如心脏组织，高达 50 – 70%的能量来自脂肪酸β-氧化，可转化脂肪酸制乙酰辅酶A，同时产生FADH2和NADH 线粒体。

这种严格的有氧氧化途径由四个不同的步骤组成：酰基辅酶A脱氢酶脱氢，烯酰辅酶A水合水合酶，通过 3-羟基酰辅酶 A 脱氢酶和硫解酶脱氢 β-酮硫醇酶裂解。

研究脂肪酸氧化的重要性

β-氧化系统在人体中的重要性体现在存在一组被归类为脂肪酸氧化的遗传疾病疾病（FAOD），这是一组异质性脂肪酸缺陷转运和氧化，并遗传为常染色体隐性遗传病，具有广泛的临床表现。

此外，有证据表明，粮农组织在粮农组织活动期间的监管胎儿发育不仅对胎儿生命很重要，而且对成年期健康和疾病的影响。粮农组织的衡量标准因此，活动为病理生理学和病理学提供了有价值的见解许多疾病的代谢基础。

检测精灵非放射性粮农组织的测定基于底物辛酰辅酶A的氧化。生成 NADH与四唑盐INT还原为甲胺素偶联。红色甲臜的强度与粮农组织的增加成正比活动。测定溶液和底物应等分储存在 -80°C.

Assay Genie检测精灵脂肪酸氧化检测试剂盒是一种高度灵敏的试剂盒用于定量测量脂肪酸的比色法细胞和组织中的氧化。

这种检测方法利用高可溶性辛酰辅酶A底物，可实现脂肪酸氧化与长链低溶性的测量底物如18C不饱和脂肪酸油酸酯。

上图：脂肪酸氧化测定：组织裂解物由健康的仓鼠心脏和与心力衰竭相关的TO2仓鼠模型。裂解物用于测定和脂肪酸氧化水平量化。

下图：脂肪酸氧化测定：辛酰辅酶A是底物，而不是反应的产物。请见图。

细胞/组织提取物的制备：

1.用冰冷的磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤~106细胞两次，并从细胞沉淀中去除PBS。细胞沉淀应储存在-80ºC.组织样品应用PBS洗涤至去除血细胞，这可能导致检测结果不一致。

2.通过稀释 1x 细胞裂解液制备足够的 10x 细胞裂解液用冰冷的dH 2 O溶液。加入 50 – 100 μl 冰冷的 1x 细胞裂解细胞沉淀溶液。通过上下移液提取细胞（温和）。将裂解物留在冰上5分钟间歇性轻微激动。如果裂解物是粘稠的，添加更多的1x细胞裂解溶液并重复移液。在以最大速度冷藏微量离心机5分钟。回收上清液用于测定。将组织在 1x 细胞裂解液中匀浆，并裂解通过离心澄清。每 25.0 毫升 5x 使用 ~1 毫克组织用于组织匀浆的细胞裂解溶液。

3.进行蛋白质测定以确定样品蛋白质浓度。通过用冰冷的 1x 稀释来标准化样品蛋白质浓度细胞裂解液至1 – 3毫克/毫升。将蛋白质样品保存在冰上次。冻融的粗蛋白裂解物可表现出酶还原活动。裂解物应储存在-80ºC。注意：不要使用缓冲液含有还原剂或SDS。

试剂解冻：

将解冻的粮农组织化验溶液和20倍粮农组织底物放在冰上。轻轻搅拌移液前的溶液。重要的是要尽量减少时间试剂解冻。使用后立即冷冻溶液。

对照溶液和反应溶液的制备：

1.对照溶液由1份dH 2 O和20份混合制备粮农组织化验解决方案，例如25μldH 2 O与500μlFAO化验混合溶液。测定过程中将新鲜制备的对照溶液保持在冰上。

2.反应溶液通过混合1份20x FAO底物和 20份粮农组织化验溶液，例如25μl 20x粮农组织底物与 500μl粮农组织测定溶液。将溶液放在冰上并立即使用。每个蛋白质样品用50μl对照溶液和50μl处理反应溶液分为两组。

Assay Genie检测精灵脂肪酸氧化检测试剂盒的应用

研究健康和病理状态（脂质代谢）的代谢途径和过程。

信号转导途径的研究。

遗传性疾病的研究，例如脂肪酸氧化障碍（FAODs）*。

心血管疾病的研究，例如心力衰竭。

胎儿发育过程中细胞能量代谢的研究。

脂肪酸氧化在癌症代谢中的影响。

*此试剂盒仅供研究使用，不能用于诊断人类疾病。

货号	品名	规格	品牌
PACO06340-50	CDK2 Antibody (PACO06340)	50ug	assaygenie
BN00773-200	Nitrite Assay Kit (Griess Reagent) (BN00773)	200T	assaygenie
BR00001	Fatty Acid Oxidation (FAO) Assay Kit	48assays	assaygenie
CNDL00059	Canine Luteinizing Hormone (LH) ELISA Kit	96T	assaygenie
CPRT1431	Human Alkaline Phosphatase Placental, BioActive	10ug	assaygenie
HUDL01657	Human Keratin 5 (KRT5) ELISA Kit	96assays	assaygenie
HUDL01980	Human N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase (NAGase) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUDL02031	Human Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin (NGAL) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUDL02141	Human Osteopontin (OPN) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUES02568	Human HMGB-1(High mobility group protein B1)ELISA Kit (HUES02568)	96T	assaygenie
HUFI00005	Human CXCL1 / GRO alpha ELISA Kit	96T	assaygenie
HUFI00120	Human Fibronectin ELISA Kit	96T	assaygenie
HUFI00187	Human KIM-1 / TIM-1 ELISA Kit	96T	assaygenie
HUFI00842	Human PRG4 (Proteoglycan 4) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUFI03466	Human Hsd17b13 (17-beta-hydroxysteroid dehydrogenase 13) ELISA Kit (HUFI03466)	96Assays	assaygenie
HUFI04779	Human LTA (lipoteichoic acids) ELISA Kit (HUFI04779)	96 Assays	assaygenie
HUFI07203	Human PIP5K3 ELISA Kit (HUFI07203)	96T	assaygenie
MKES00061	Monkey C3a (Complement Component 3a) ELISA Kit (MKES00061)	96T	assaygenie
MODL00688	Mouse Interleukin 19 (IL-19) ELISA Kit	96assays	assaygenie
MODL01409	Mouse Protein Z Dependent Protease Inhibitor (ZPI) ELISA Kit	96T	assaygenie
MOES00941	Mouse CYPD (Cyclophilin D) ELISA Kit (MOES00941)	96assays	assaygenie
MOFI00232	Mouse HMGB1 ELISA Kit	96T	assaygenie
MOFI00389	Mouse TREM2 ELISA Kit	96T	assaygenie
MOFI00738	Mouse COL4 / Collagen IV ELISA Kit	96T	assaygenie
MOFI01251	Mouse 4-HNE (4-Hydroxynonenal) ELISA Kit	96Assays	assaygenie
MOFI01271	Mouse ANA(Anti-nuclear Antibody) ELISA Kit	96T	assaygenie
RTEB0255	Rat Complement C4 (C4) ELISA Kit	96T	assaygenie
SBRS0735	Human IL-18 Pharmaassaygenie ELISA Kit (SBRS0735)	96T	assaygenie
SBRS1436	Mouse IL-36 alpha/IL-1F6 PharmaGenie ELISA Kit (SBRS1436)	96assays	assaygenie
SBRS1438	Mouse IL36G PharmaGenie ELISA Kit (SBRS1438)	96assays	assaygenie
ACAM00001	assaygeniePlex Filter Plate Washer	1plate	assaygenie
AGIM0017-100	dsDNA monoclonal antibody (AGIM0017)	100ugin100ul	assaygenie
BA0018	Beta-Glucosidase Activity Assay Kit (BA0018)	100T	assaygenie
BN01039	NNMT Inhibitor Screening Assay Kit	100T	assaygenie
BN01132	Factor XIa Activity Assay Kit (Colorimetric) (BN01132)	100t	assaygenie
CBCAB00008	PLCG1 (Phospho-Tyr783) Colorimetric Cell-Based ELISA Kit	96T	assaygenie
CBCAB00151	RIPK2 (Phospho-Ser176) Colorimetric Cell-Based ELISA Kit	96T	assaygenie
CNFI00009	Canine IFN gamma ELISA Kit	96T	assaygenie
CPRT1430	Human Alkaline Phosphatase Placental	5ug	assaygenie
HDBS0035-100	Anti-CEACAM5 (labetuzumab biosimilar) mAb	100uL	assaygenie
HDPT0216	Human TLR8 Recombinant Protein (hFc Tag)	50UG	assaygenie
HDPT0417	Human TLR9 Recombinant Protein (hFc Tag) (HDPT0417)	50ug	assaygenie
HMFI0001-C	Hamster IL-6 ELISA Kit (HMFI0001-C)	96T	assaygenie
HMFI0009	Hamster TNF-A(Tumor Necrosis Factor-A) ELISA Kit	96T	assaygenie
HMFI0010-S	Hamster IFN-gamma (Interferon gamma) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUEB0609	Human Thyroglobulin (TG) ELISA Kit	96 Assays	assaygenie
HUEB0701	Human Fibroleukin (FGL2) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUEB1201	Human Huntingtin (HTT) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUEB1478	Human DNA replication factor Cdt1 (CDT1) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUEB2269	Human Integrin beta-1 (ITGB1) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUES02462	Human IgA1 (Immunoglobulin A1) ELISA Kit (HUES02462)	96T	assaygenie
HUES03247	Human SC5b9 (soluble terminal complement complex) ELISA Kit (HUES03247)	96T	assaygenie
HUF103043	Human DLL4(Delta-like protein 4) ELISA Kit	46.875pg/ml	assaygenie
HUFI00932	Human MYB ELISA Kit	96T	assaygenie
HUFI01781	Human SIRT6 ELISA Kit	96Assays	assaygenie
HUFI03028	Human Galactose-Deficient IgA1(Galactose-Deficient IgA1) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUFI03088	Human 2, 5-OAS(2, 5-oligoadenylate synthetase) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUFI03139	Human SAKL(Soluble alpha-Klotho) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUFI03207	Human PRGN(Progranulin) ELISA Kit	96T	assaygenie
HUFI03434	Human HEK 293 HCPs (HEK 293 host cell proteins) elisa kit (HUFI03434)	96T	assaygenie
HUMB00024	Bevacizumab (Avastin®) ELISA Kit	96T	assaygenie
KES0051	Rabbit CCL4 (MIP-1 beta) DIY ELISA Kit	Upto10Plates	assaygenie
KPRT0425	Recombinant Bovine PDGF-BB Protein	5ug	assaygenie
MAES0082	Acid Phosphatase (ACP) Activity Assay Kit	96T	assaygenie
MKES00010	Monkey A beta1-40 (Amyloid Beta Peptide 1-40) ELISA Kit (MKES00010)	96T	assaygenie
MKES00024	Monkey CT (Calcitonin) ELISA Kit (MKES00024)	96T	assaygenie
MKES00054	Monkey ANG II (Angiotensin II) ELISA Kit (MKES00054)	96T	assaygenie
MKES00064	Monkey TL1A (Tumor Necrosis Factor Related Ligand 1A) ELISA Kit (MKES00064)	96assays	assaygenie
MKF100032	Monkey IgE ELISA Kit	96T	assaygenie
MKFI00008	Monkey APOC3 / Apolipoprotein C-III ELISA Kit	96T	assaygenie
MKFI00010	Monkey Complement C3 / C3 ELISA Kit	96T	assaygenie
MKFI00030	Monkey IFN gamma ELISA Kit	96T	assaygenie
MKFI00032	Monkey IgE ELISA Kit	96T	assaygenie
MKFI00044	Monkey Insulin ELISA Kit	96T	assaygenie
MODL00049	Mouse Albumin (ALB) ELISA Kit	96T	assaygenie
MOEB0659	Mouse Glycosylated hemoglobin A1c (HbA1c) ELISA Kit	96T	assaygenie
MOEB1627	Mouse Pyridoxal phosphate phosphatase (Pdxp) ELISA Kit	96T	assaygenie
MOEB1723	Mouse IL-2rb ELISA Kit	96T	assaygenie
MOEB2528	Mouse 5-Hydroxyindoleacetic acid (5HIAA) ELISA Kit	96T	assaygenie
MOEB2554	Mouse Methylmalonic Acid (MMA) ELISA Kit	96T	assaygenie
MOES00214	Mouse CYPA (cyclophilin A) CLIA Kit (MOES00214)	96assays	assaygenie
MOES00215	Mouse CYPB (Cyclophilin B) CLIA Kit (MOES00215)	96assays	assaygenie
MOFI00245	Mouse SLC25A5 / ADP / ATP translocase 2 ELISA Kit	96T	assaygenie
MOFI00383	Mouse Glucagon ELISA Kit	96Assays	assaygenie
MOFI00393	Mouse SARDH / Sarcosine dehydrogenase ELISA Kit	96Assays	assaygenie
MOFI00854	Mouse GLP1/Glucagon Like Peptide 1 ELISA Kit	96Assays	assaygenie
MOFI00882	Mouse HB-EGF / HBEGF ELISA Kit	96T	assaygenie
MOFI00927	Mouse IL-15 ELISA Kit	96Assays	assaygenie
MOFI00962	Mouse Lactoferrin ELISA Kit	96T	assaygenie
MOFI01258	Mouse IL-8 ELISA Kit (MOFI01258)	96T	assaygenie
MOFI01283	Mouse Calprotectin(Calprotectin) ELISA Kit	96T	assaygenie
MOFI01318	Mouse IL-31 ELISA Kit	96Assays	assaygenie
MOFI01356	Mouse IL-36 gamma ELISA Kit	96T	assaygenie
PACO04460	Phospho-NPM1 (T234) Antibody	50ug	assaygenie
RPPB3176	Human CHMP4A Recombinant Protein (RPPB3176)	5ug	assaygenie
RPPB4377	Human RAC1 Recombinant Protein (RPPB4377)	50ug	assaygenie
RPPB5129	Human VPS24 Recombinant Protein (RPPB5129)	20ug	assaygenie
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