酒中氨基甲酸乙酯的测定-GC-MS法 参照GB 5009.223-2014 国标方法
酒中氨基甲酸乙酯的测定
方法一、GC-MS 法 参照GB 5009.223-2014
摘要：本文参照食品安全国家标准方法《GB 5009.223-2003 食品中氨基甲酸乙酯的测定》 ，进行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的测定。采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土）进行样品前处理，GC-MS法测定，结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0 μg / kg（取样2.00g），回收率在98.3%～104.5%；白酒样品的日间精密度测试，RSD<3%。方法简单，产品稳定，结果准确灵敏，完全满足分析检测的要求。
氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate, EC)，是一种致癌物，可以引起肺肿瘤、淋巴癌、肝癌、皮肤癌等。它是发酵食物和酒精饮品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物。2007年，世界卫生组织的国际癌症研究机构( IARC) 正式将氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 归为2A类致癌物。因此对相关食品中进行氨基甲酸乙酯的检测和监测是非常必要的。
一、试剂和材料
标准溶液配制
1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取10.0 mg D5-氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至10 mL。
2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：准确吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯标准贮备液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL。
1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取0.5000 g氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至50 mL。
分别准确吸取一定量氨基甲酸乙酯标准，加100 μL 2.0 μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液，用甲醇定容至1.0 mL，得到10.0、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0、1000.0 ng/mL的标准使用液（内含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）
固相萃取柱：Cleanert JP氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土）
气相色谱柱：DA-INNOWAX柱
二、实验方法
样品前处理
准确量取 2.00 ml 酒样（注：啤酒样品EC含量较低，取4 mL样品上样），加 100 μL 2.0 μg/ mL D5-氨基甲酸乙酯内标使用液、氯化钠 0.3 g（白酒、酱油不加），超声溶解、混匀，然后加样到氨基甲酸乙酯上，抽真空，让试样慢慢渗入到Cleanert JP氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱中，静置约 10 min，先用10 mL 正己烷淋洗除杂，然后用 15 mL 5%乙酸乙酯/乙醚溶液以1 mL/min 流速洗脱并收集于10 mL 具塞刻度试管中，在室温下用氮气缓缓吹至0.5mL 左右，用甲醇定容至1.0 mL 制成测定液供GC/MS分析，同时做空白。
GC-MS条件
色谱柱：DA-INNOWAX柱，30 m*0.25 mm*0.25 μm；
进样口温度：220℃；柱温：初温 50℃，保持 1 min，然后以 8℃ / min 升至 180，然后以 15℃/ min 升至 210℃ 保持5 min；
载气：氦气，纯度≥99.999％
流速：1 mL/min；
电离方式：EI源。
离子源温度：230℃；
进样方式：不分流进样；
样量：1-2μL；
氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）： 62、76、89；定量离子62；
D5-氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）64、76；定量离子64
三、实验结果
色谱图
方法一、GC-MS 法 参照GB 5009.223-2014
摘要：本文参照食品安全国家标准方法《GB 5009.223-2003 食品中氨基甲酸乙酯的测定》 ，进行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的测定。采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土）进行样品前处理，GC-MS法测定，结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0 μg / kg（取样2.00g），回收率在98.3%～104.5%；白酒样品的日间精密度测试，RSD<3%。方法简单，产品稳定，结果准确灵敏，完全满足分析检测的要求。
氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate, EC)，是一种致癌物，可以引起肺肿瘤、淋巴癌、肝癌、皮肤癌等。它是发酵食物和酒精饮品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物。2007年，世界卫生组织的国际癌症研究机构( IARC) 正式将氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 归为2A类致癌物。因此对相关食品中进行氨基甲酸乙酯的检测和监测是非常必要的。
一、试剂和材料
标准溶液配制
1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取10.0 mg D5-氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至10 mL。
2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：准确吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯标准贮备液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL。
1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取0.5000 g氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至50 mL。
分别准确吸取一定量氨基甲酸乙酯标准，加100 μL 2.0 μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液，用甲醇定容至1.0 mL，得到10.0、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0、1000.0 ng/mL的标准使用液（内含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）
固相萃取柱：Cleanert JP氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土）
气相色谱柱：DA-INNOWAX柱
二、实验方法
样品前处理
准确量取 2.00 ml 酒样（注：啤酒样品EC含量较低，取4 mL样品上样），加 100 μL 2.0 μg/ mL D5-氨基甲酸乙酯内标使用液、氯化钠 0.3 g（白酒、酱油不加），超声溶解、混匀，然后加样到氨基甲酸乙酯上，抽真空，让试样慢慢渗入到Cleanert JP氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱中，静置约 10 min，先用10 mL 正己烷淋洗除杂，然后用 15 mL 5%乙酸乙酯/乙醚溶液以1 mL/min 流速洗脱并收集于10 mL 具塞刻度试管中，在室温下用氮气缓缓吹至0.5mL 左右，用甲醇定容至1.0 mL 制成测定液供GC/MS分析，同时做空白。
GC-MS条件
色谱柱：DA-INNOWAX柱，30 m*0.25 mm*0.25 μm；
进样口温度：220℃；柱温：初温 50℃，保持 1 min，然后以 8℃ / min 升至 180，然后以 15℃/ min 升至 210℃ 保持5 min；
载气：氦气，纯度≥99.999％
流速：1 mL/min；
电离方式：EI源。
离子源温度：230℃；
进样方式：不分流进样；
样量：1-2μL；
氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）： 62、76、89；定量离子62；
D5-氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）64、76；定量离子64
三、实验结果
色谱图
图1 氨基甲酸乙酯及内标总离子图
图2 氨基甲酸乙酯质谱图
3 内标 D5-氨基甲酸乙酯质谱图
标准曲线
酒样加标的回收率及精密度
表1 白酒样品加标的回收率及精密度
| 序号 | 白酒样品 （mg/L） |
加标量（mg/L） | 测定浓度（mg/L） | 回收量（mg/L） | 回收率（%） | 平均回收率 (%) |
RSD % |
| 1 | 73.86 |
100 | 178.32 | 104.46 | 104.5 | 101.4 |
2.51 |
| 2 | 100 | 176.78 | 102.92 | 102.9 | |||
| 3 | 100 | 175.64 | 101.78 | 101.8 | |||
| 4 | 100 | 173.25 | 99.39 | 99.4 | |||
| 5 | 100 | 172.20 | 98.34 | 98.3 |
表2 白酒样品日间精密度
| 测定数据（mg/L） | 平均值 | RSD% | ||||||
| 60.47 | 60.79 | 59.05 | 63.04 | 58.15 | 56.61 | 59.03 | 59.13 | 2.94 |
| 58.99 | 59.75 | 60.24 | 57.49 | 59.77 | 56.91 | 57.60 | ||
注：相同的样品，，每天测定2次，连续7天内测定数据
方法检出限
当试样取2.00g时，本方法氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0μg/kg。
四、结论
本文采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相柱（碱性硅藻土）前处理结合DA-INNOWAX柱进行白酒中氨基甲酸乙酯的测定，结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0 μg/kg，回收率在98.3% ～104.5%，完全满足食品安全国家标准GB5009.223-2014方法的检测要求。
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