Exocell Albuwell M说明书

 

Exocell是一家生命科学公司，为糖尿病及其并发症管理相关的研究和开发提供市场的产品和服务。

Exocell是开发，营销和执行新型临床和研究诊断分析的者，可帮助客户进行基础科学研究以及关于糖尿病及相关肾脏和血管疾病诊断和治疗的实验动物和临床研究。

Exocell Albuwell M说明书

Exocell mAlbumin

m Albumin
Manufacturer/Trade:	Exocell / Albuwell M
Catalogue Numbers:	1011 Strip Plate
Methodology:	Competitive ELISA
Summary of procedure:	Albuwell M是一种直接竞争ELISA(抗体捕获)，目的是通过测定尿白蛋白来监测小鼠肾功能。完成测定、样品及抗小鼠白蛋白抗体-hrp c的测定。 在白蛋白涂层井中加入共轭剂。抗体结合物与涂覆在平板上的白蛋白或与流体相的白蛋白发生反应，因此形成竞争结合的概念。 经过30分钟的孵化后，板被洗去反应物在流体相中。只有与平板上的白蛋白结合在一起的共轭物才能被发现，而且它是用TMB在显色剂中检测到的。 IC反应颜色强度与流体中白蛋白浓度的对数成反比。检测可能在不到一个小时内完成。
所需样本	Urine, 10ul
分析范围：	0.156-10 ug/mL
度	在测定的有效范围内的样品的测定和分析间的精密度为平均值的≤10%。。

 

 

Albuwell M

 

分析流程图

 

稀释标准和样品

 

加入抗小鼠白蛋白抗体-HRP孵育30分钟。

 

制水板

 

加入TMB显色剂孵育5-10分钟加入酸性色塞

 

在450 nm处测量吸光度完成计算

 

Albuwell M：小鼠微量白蛋白尿ELISA。

 

用途：Albuwell M是一种酶联免疫吸附试验(ELISA)，用于测定小鼠尿液中白蛋白的含量。

 

技术背景：Albuwell M是一种评估小鼠肾功能的体外工具.该方法操作简单，对小鼠白蛋白具有较高的特异性。这是一种竞争性的抗体捕获酶联免疫吸附试验。 在一个直接的模式下被擦伤。为此，抗白蛋白抗体与辣根过氧化物酶(抗辣根白蛋白抗体-HRP)结合，即直接标记。

 

为完成检测，在小鼠白蛋白包被良好的基础上加入样品和抗小鼠白蛋白抗体-HRP。抗体与固定在固定相上的白蛋白或THA相互作用和结合。 在流体阶段，因此竞争约束的概念。洗涤可将未结合的Ab-HRP-白蛋白和流体相中的其他反应物从井中去除.只有结合了t的抗体结合物 在显色反应中，用四甲基联苯胺(TMB)检测固定相的白蛋白。反应用酸停止，在450 nm处测定吸光度。 吸光度与流体中白蛋白浓度的对数成反比。

 

标本收集和储存：不加防腐剂的样品收集，必要时用离心法澄清。在4℃保存1周或在-60℃保存2个月。公共关系 IOR测定，允许样品达到室温。不要用热解冻冷冻样品。

 

工具包内容：您的Albuwell M工具包应包含下列项目：

 

2个Albuwell M测试板

 

2 NHEBSA(稀释剂)

 

小鼠血清白蛋白(MSA)标准

 

2抗小鼠白蛋白抗体-HRP结合物

 

2色显色剂

2色塞

 

操作指南

 

MSA标准，NHEBSA和抗小鼠白蛋白抗体-HRP结合制剂含有0.05%的Proclin300(活性成分异噻唑酮)作为防腐剂.色塞含稀释(2.0 N)硫酸a cash in drawer 现金支付

 

阿尔布韦尔M板是预涂和准备使用。所有的试剂盒试剂都准备好使用液体。结果表明，自来水洗板工艺在实验和实际操作中具有较好的适用性。 Ality控制上下文。然而，如果没有自来水或证明不合适，我们建议使用含有0.15 M NaCl成分的EIA洗涤缓冲液，

 

0.01M三乙醇胺(pH6.8)、0.05%吐温20和0.05%Proclin 300(新配制的缓冲液可省略防腐剂)。

 

能够输送10，50，100，

 

需要120和200 ul。推荐可输送50和100 ul的多通道吸管。此外，还需要小试管才能完成稀释(微管在 (本申请)。后，需要一个微板阅读器来测定450 nm处的吸光度。

 

化验程序：允许试剂和样品在进行检测前到达室温。

 

标准稀释：本程序描述了标准七(7)倍稀释剂的制备.

 

每管制备8根微管，每管含200μl的NHEBSA。

 

管的标签分别为“C”和1-7。

 

将MSA标准的200 ul传输到1管。

 

将液体吸出并排出5次，将其混合。

 

将200 ul溶液从1管转移到2管。

 

和以前一样混在一起。

 

通过7管继续这一过程。

1-7管的稀释度分别为10.0、5.0、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156μg/mL。

 

尿液样品稀释液的制备：准确测定尿白蛋白取决于适当的样品稀释度。在大多数情况下，1：13稀释就足够了，但是收集方法和动物知识。 dney功能(或功能障碍)可能导致异常高或极低的浓度。对于初步研究，明智的做法是在三种浓度下完成分析，即1：20。 和1点80分。所获得的结果将允许选择宜(单一)稀释后的分析。

 

下面的示例说明了1：13稀释协议。

 

为每个样品准备并贴上一根微绒毛管。

 

在每管中加入120 ul NHEBSA

 

用干燥新鲜的针尖将10μl的样品转移到合适的管子上，用反复吸入和排出的方法冲洗出针尖。

 

把管子旋涡一下。

 

对其余的样本继续这一过程。

 

每个样品现在稀释1：13在NHEBSA。

 

添加对照、标准MSA稀释物和样品到板上：用不可磨灭的标记(1-12)标记条带。这将允许重建板，如果在瓦邦期间脱落的条带。 城建程序。稀释后的标准和样品可直接添加到干板上。

 

这个平板设计包括两个对照：一个称为C0的阴性对照和一个称为C1的正对照。这些分别放置在A1和A2井中。所有其他井都有稀释井。 ARD或稀释样品。测定量为50μl。

 

从管C到A1井加入100 ul的NHEBSA。这是负控制的“C0”，并将用于规范或“空白”的微型平板阅读器。

 

从C管到A2井加50μl的NHEBSA。这是阳性对照“C1”，并作为一个定性指标的分析性能。

 

用一个新鲜的针尖，在标准稀释数7中预湿顶部，并将50μl的流失量转移到h1和h2井。

 

用同样的针尖，在标准稀释数6中预湿/冲洗针尖，并将50μl的液体转移到G1和G2井。

 

继续以这种方式将稀释后的标准品转移到盘子上，即预先润湿/冲洗针尖，然后依次转移标准的异形物。

 

使用一种新的针尖，在次稀释样品中预湿针尖，并将50μl的液体转移到A3和A4井。

 

注意更换针尖，每次都要预湿，继续往盘子里加入稀释的样品。

 

该平板现在包含控制和稀释标准，在井A-H，1，2，和稀释的实验样品一式两份，在板的平衡。

 

初步孵育：与抗小鼠白蛋白抗体-HRP结合物的反应

 

在WellsA2-A12和B-H1-12上加入50μl的抗小鼠白蛋白抗体-HRP结合物.

 

盖上盘子，孵育30分钟。

 

洗盘：使用洗碗机或用手洗盘子，如下所示：

 

从井中取出液体，即吸出液体或倒入水槽。

 

用清水或冲洗缓冲液将井注满。

 

像以前一样去除液体。

 

“2”和“3”构成一个清洗周期。

重复这个过程，总共产生10个清洗周期。

 

将盘子倒置在纸巾上，轻轻拍打，去除多余的液体。

 

色彩发展：

 

添加100 ul颜色开发人员到每个井。

 

5-10分钟

 

每口井加100μl的彩色塞子。

 

分析：检查盘子。在A1井中的负控制井C0应该有很少或没有颜色，而在A2井中的正控制井C1应该是强烈的颜色。 在盘子里。其余的井应该表现出在这两个之间的潜逃。

 

这种分析假设计算机和分析软件，例如MS Excel是可用的。

 

使用平板阅读器在450 nm处测定吸光度，用A1中的C0井“空白”阅读器。

 

准备一份电子表格，输入适当的数据，包括标准稀释度、浓度、样品稀释度和吸光度数据。确定复制井的平均值。

 

用x轴上的对数[MSA]和y轴上的平均吸光度，准备一幅标准稀释度的半对数图。这是剂量-反应或标准曲线。

 

属于剂量-反应曲线线性部分的数据构成了试验的可用部分。

 

将这些数据进行半对数分析，得到一个形式的数学模型。

 

log10[MSA]=mA 450 b

 

MSA浓度是通过从这个方程中提取计算值的反对数来确定的。

 

乘以13(或反稀释因子)校正稀释。

 

质量控制：

 

记录保存：很好的实验室实践是记录试剂盒组件和试剂的批号和日期。

 

样品处理：如上文所述，样品应被保护、处理和存储。老鼠的尿液经常被食物和粪便物质污染，这些污染物具有潜在的来源。 错误。建议进行离心澄清样品。

 

稀释标准和样品仔细。对于这些标准，可以使用一个单一的来准备稀释序列。对于实验样本，每个尿液样本都应使用新鲜的。

 

限制，边界:

 

样品不得含有HRP抑制剂，即Sodium azide。这些都会影响结果

 

研究人员有责任确定尿液中是否存在实验化合物或其代谢物会影响检测结果。

 

严重的微生物污染可能影响检测结果。

 

血尿样本即使经离心澄清，也不适合使用，因为血液流动是污染的迹象，而且血液中的白蛋白浓度约为2 000蒂姆。 通常在尿液中发现的。精液中含有大量的白蛋白，也是潜在的污染源。

 

解决问题：

 

添加颜色开发人员后不会出现颜色：一个或多个试剂可能受到8 oC以上存储的不利影响。可能没有添加一个或多个试剂。重复试验。一定要储存t 他的装备很合适。

 

水井中的颜色太轻：可能需要与颜色显影剂进行更长时间的孵化。如果显影10分钟后颜色仍然太浅，重复检测，但增加初级孵育 1 小时，钟头.

 

井中颜色太暗：缩短开发时间。如果5分钟的发育仍然太暗，重复检测，并将二次孵化减少到15分钟。

 

 

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