avidity bulk BirA说明书

bulk BirA-大容量BirA：BirA生物素蛋白连接酶大容量反应试剂盒，980.00美元

BirA生物素蛋白连接酶以高效且有针对性的方式，通过ATP中间体（生物素5'-腺苷酸）将d-生物素共价添加至生物素受体肽/蛋白质。该试剂盒包含300 µg BirA酶，用于需要大规模反应或在工作中更频繁地使用BirA生物素化反应的人。

请注意：我们强烈建议使用AviTag氨基酸序列，而不是其他生物素肽序列。BirA酶以2倍于天然底物（BCCP）的反应速率对AviTag序列进行生物素化处理，并且比使用中的其他肽序列高出一个数量级或更多。与其他肽序列的生物素化处理相比，AviTag™需要较少的酶量和较短的孵育时间，从而大限度地减少了与蛋白酶和蛋白质不稳定性相关的辅助问题。

产品信息

套件提供为：

• 十（10）个小瓶，每瓶10 µL 3mg / mL BirA生物素-蛋白质连接酶（总共300 µg）
• 十（10）个小瓶，每个1.5 mL BiomixA（0.5 M Bicine缓冲溶液，pH 8.3）
• 十（10）个小瓶，每个1.5 mL BiomixB（100 mM ATP，100 mM Mg2 +乙酸盐，500 µM d-生物素）
• 十（10）个小瓶，每个额外的BIO-200（500 µM d-生物素）1.5 mL

BirA生物素蛋白连接酶（EC 6.3.4.15）通过ATP中间体（生物素5'-腺苷酸）以高效且有针对性的方式将d-生物素共价添加到生物素受体肽/蛋白质上。酶促生物素化蛋白的下游应用是多种，重要和强大的。通常利用*的生物素-亲和素/链霉亲和素相互作用来进行亲和层析或将蛋白质固定在表面或底物上。通过抗生物素抗体或抗生物素蛋白/链霉亲和素-报告酶偶联物（-HRP，-碱性磷酸酶）或荧光探针进行蛋白质检测成为可能。生物素化的MHC分子的多聚体形式是免疫生物学中流行的工具。

当与我们的AviTag™生物素受体肽氨基酸序列结合使用时，生物素化的发生率是自然大肠杆菌BCCP底物的两倍，并且比其他肽序列的生物素化高出一个数量级或更多。因此，与其他可用序列相比，AviTag™序列需要较少的BirA酶和较短的孵育时间即可完成生物素化反应。如果需要考虑蛋白质的不稳定性或蛋白酶活性，这对于下游的成功可能很重要。

我们的BirA酶是野生型大肠杆菌，由birA基因编码，并通过传统方法纯化至纯度超过99％。

该酶的其他名称包括：生物素连接酶；生物素操纵子阻遏蛋白 birA; 生物素全酶合成酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；生物素-[乙酰-CoA-羧化酶]连接酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；生物素：脱羧羧化酶连接酶；生物素全酶合成酶；HCS。

avidity BirA500说明书

BirA500 – BirA-500: BirA biotin-protein ligase standard reaction kit,  $250.00

BirA500-BirA-500：BirA生物素蛋白连接酶标准反应试剂盒，250.00美元

BirA生物素蛋白连接酶（EC 6.3.4.15）激活生物素形成5'-腺苷酸生物素，并将生物素转移至生物素受体蛋白（如AviTag™肽）。它还起着生物素操纵子阻遏物的作用。该蛋白质由birA基因编码。

请注意：我们强烈建议使用AviTag™氨基酸序列，而不是其他生物素肽序列。BirA酶以2倍于天然底物（BCCP）的反应速率对AviTag™序列进行生物素化处理，并且比使用中的其他肽序列高出一个数量级或更多。与其他Biotinylation-of-Peptide序列相比，AviTag™需要较少的酶量和较短的孵育时间，从而大程度地减少了与蛋白酶和蛋白质不稳定性相关的辅助问题。

产品信息

套件随附以下物品：

• 两（2）个小瓶，每瓶20uL 1mg / mL BirA生物素蛋白连接酶（总共40ug）
• 两（2）个小瓶，每个1.5mL BiomixA（0.5M Bicine缓冲溶液，pH 8.3）
• 两（2）个每瓶1.5mL的BiomixB（100mM ATP，100mM Mg（OAc）2、500uM d-生物素）
• 两（2）个每小瓶1.5mL的BIO-200（500uM d-生物素）

BirA生物素蛋白连接酶（EC 6.3.4.15）通过ATP中间体（生物素5'-腺苷酸）以高效且有针对性的方式将d-生物素共价添加到生物素受体肽/蛋白质上。酶促生物素化蛋白的下游应用是多种，重要和强大的。通常利用*的生物素-亲和素/链霉亲和素相互作用来进行亲和层析或将蛋白质固定在表面或底物上。通过抗生物素抗体或抗生物素蛋白/链霉亲和素-报告酶偶联物（-HRP，-碱性磷酸酶）或荧光探针进行蛋白质检测成为可能。生物素化的MHC分子的多聚体形式是免疫生物学中流行的工具。

当与我们的AviTag™生物素受体肽氨基酸序列结合使用时，生物素化的发生率是自然大肠杆菌BCCP底物的两倍，并且比其他肽序列的生物素化高出一个数量级或更多。因此，与其他可用序列相比，AviTag™序列需要较少的BirA酶和较短的孵育时间即可完成生物素化反应。如果需要考虑蛋白质的不稳定性或蛋白酶活性，这对于下游的成功可能很重要。

我们的BirA酶是野生型大肠杆菌，由birA基因编码，并通过传统方法纯化至纯度超过99％。该酶的其他名称包括：生物素连接酶；生物素操纵子阻遏蛋白 birA; 生物素全酶合成酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；生物素-[乙酰-CoA-羧化酶]连接酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；生物素：脱羧羧化酶连接酶；生物素全酶合成酶；HCS。

avidity BirA 生物素说明书

Bulk BirA – Bulk BirA：BirA 生物素-蛋白质连接酶批量反应试剂盒，980.00 美元

BirA 生物素-蛋白质连接酶通过 ATP 中间体（生物素 5'-腺苷酸）以高效和有针对性的方式将 d-生物素共价添加到生物素受体肽/蛋白质上。该试剂盒包含 300 µg BirA 酶，适用于需要更大规模反应或在工作中更频繁使用 BirA 生物素化反应的人员。

请注意：我们强烈建议使用 AviTag 氨基酸序列而不是其他生物素化肽序列。BirA 酶以 2 倍于天然底物 (BCCP) 的反应速率对 AviTag 序列进行生物素化，并且与使用的其他肽序列相比，其反应速率可达到一个数量级或更高。与其他多肽生物素化序列相比，AviTag™ 需要更少量的酶和更短的孵育时间，从而最大限度地减少与蛋白酶和蛋白质不稳定性相关的辅助问题。

产品信息

套件作为：

• 十 (10) 瓶 10 µL，每瓶 3mg/mL BirA 生物素-蛋白质连接酶（总共 300 µg）
• 十 (10) 个小瓶，每瓶 1.5 mL BiomixA（0.5 M bicine 缓冲溶液，pH 8.3）
• 十 (10) 瓶每瓶 1.5 mL BiomixB（100 mM ATP、100 mM Mg2+乙酸盐、500 µM d-生物素）
• 十 (10) 个 1.5 mL 小瓶，每个额外的 BIO-200（500 µM d-生物素）

BirA 生物素-蛋白质连接酶 (EC 6.3.4.15) 通过 ATP 中间体（生物素 5'-腺苷酸）以高效且有针对性的方式将 d-生物素与生物素受体肽/蛋白质共价添加。酶促生物素化蛋白质的下游应用是多种多样的、重要的和强大的。生物素-亲和素/链霉亲和素相互作用经常被用于亲和层析或蛋白质固定在表面或底物上。通过抗生物素抗体或亲和素/链霉亲和素-报告酶偶联物（-HRP、-碱性磷酸酶）或荧光探针进行蛋白质检测成为可能。生物素化 MHC 分子的多聚体形式是免疫生物学中的常用工具。

当与我们的 AviTag™ 生物素受体肽氨基酸序列结合使用时，生物素化发生的速度是天然大肠杆菌 BCCP 底物的两倍，与其他肽序列的生物素化相比，其发生率高出一个数量级或更多。因此，与其他可用序列相比，AviTag™ 序列需要更少的 BirA 酶和更短的孵育时间来完成生物素化。如果蛋白质不稳定性或蛋白酶活性是一个问题，这可能对下游的成功很重要。

我们的 BirA 酶是大肠杆菌野生型，由 birA 基因编码，并通过传统方法纯化至 99% 以上的纯度。

这种酶的其他名称包括：生物素连接酶；生物素操纵子阻遏蛋白；比拉; 生物素全酶合成酶；生物素-[乙酰辅酶A羧化酶]合成酶；生物素-[乙酰辅酶A-羧化酶]连接酶；生物素-[乙酰辅酶A羧化酶]合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；生物素：脱羧酶连接酶；生物素全酶合成酶；HCS。

BirA生物素蛋白连接酶标准反应试剂盒

• 产品概述: 

  BirA生物素蛋白连接酶标准反应试剂盒由AVIDITY公司生产，生物素连接酶(Biotin Protein Ligase)用于催化生物素化反应，将生物素连接到特定的蛋白上。反应原理是通过ATP三磷酸腺苷中间体(生物素5’-腺苷酸)以和靶向的方式将d-生物素共价连接到生物素受体肽/蛋白上。

  强烈建议使用AviTag氨基酸序列，而不是其他生物素化的肽序列。BirA酶生物素化AviTag序列是天然底物(BCCP)反应速率的两倍，并且比使用的其它肽序列多一个数量级或更多。与肽序列的其他生物素化相比，AviTagTM需要更少的酶量和更短的孵育时间，从而小化与蛋白酶和蛋白质不稳定性相关的辅助问题。

来源：重组蛋白（Escherichia coli）

l 纯度：

 纯度＞95%，无可检测的蛋白酶活性。

l 应用：

生物素受体蛋白的生物素化。

l 储存条件：

干冰运送，解冻后分装，避免反复冻融。

长期保存置于-80℃，短期内使用置于-20℃，频繁使用可短时置于4℃。在4℃条件下保存三个月保可持>90%的酶活性。

10×Biotin Ligase Buffer A、B和D-Biotin储存于-20℃，可反复冻融,，生物素蛋白连接酶BirA，4℃存放一个月，活性保留>80。长期保存-80度，每次解冻，酶活性降低10%。

l 产品成分

BirA biotin-protein ligase：(3mg/ml)

10×Biotin Ligase Buffer A： 0.5 M Bicine，pH 8.3  

10×Biotin Ligase Buffer B： 100 mM ATP, 100 mM MgOAc, 500 μM D-Biotin

D-Biotin：500 µM D-Biotin

反应体系示例（250ul）（底物浓度 :≤40uM））

    (*每10 nmol AviTag’d底物需2.5μg BirA, 根据底物浓度按倍数放大本体系)

     注意：有些情况可能有必要浓缩您的底物以满足40μM标准。

相关产品信息

影响因素

1  AviTag的底物肽(蛋白质)浓度与生物素化效率  

为了确保生物素化的效率，建议在终的反应混合物中AviTag的底物尽可能接近40μM，反应混合物中的底物浓度越低， 生物素化完成的时间越长。例如，40μM时在30-40分钟内*生物素化，但在4μM时，使用同样的方法需要5个多小时。底物浓度与BirA酶活性的关系如图A。

    2  反应缓冲体系对BirA酶活性的影响

氯化钠（>100 mM）、甘油（>5% W/V）、硫酸铵（>50 mM）等许多常见的缓冲液成分会抑制生物素连接酶的活性。当底物蛋白（多肽）确有必要使用这些试剂时，应尽量降低浓度。底物中可含有Tris(pH 8.0)， 宜浓度为10 mM，不超过50 mM。

3 底物浓度与BirA酶的数量关系

通常，对于每10 nmol底物(40μM)，我们建议2.5μg BiRA酶 生物素化条件30℃下30 – 40分钟或室温下约1小时。或者4℃过夜，ATP在4℃时水解更慢，但该反应过程可能会因为ATP降解引起的不*生物素化，需额外补充ATP解决。

BufferA和BufferB已经针对生物素化反应进行优化，底物浓度不超过40µM。如果底物浓度

达40~80µM，则要加入额外的生物素，反应如下：1份10×BiotinLigaseBufferA，1份

10×Biotin Ligase Buffer B，7份酶底物混合物和1份D-Biotin。如果底物浓度超过80 µM，请酌情稀释底物或与技术人员联系获取帮助。

4  BirA酶纯度

 BirA酶经过测试，显示没有可测量的蛋白酶污染。但较长的孵育时间确实会带来目标蛋白被蛋白酶水解的风险，因此建议使用短的*生物素化目标蛋白的孵育时间。较长的孵育时间溶液中的ATP会随时间水解，降低可用的生物素化反应的ATP。因此，快速完成反应将有利于实现大生物素化。

■ FAQ：

Q：如何阻止蛋白酶降解底物？

          A：本产品的生物素连接酶经严格质量控制，没有蛋白酶活性。如果用于生物素化的底物蛋白是未经纯化的粗提蛋白，建议加入适量的蛋白酶抑制剂，以防止在生物素化的过程中发生降解。

 Q：如何确定参与反应的适本酶量及反应条件？

          A：由于不同蛋白性质差别很大、生物酶反应存在一定的不确定性，说明书中所述反应条件并不*适用于所有蛋白。建议用户可以进行预实验：可先取少量蛋白，分成若干份相同量的底物，加入不同稀释度的酶，相应量的Buffer A、 B， 30℃ 1 h （或其它时间、温度条件）反应，以SDS-PAGE Loading Buffer终止反应后，电泳并转移至NC膜上进行Western Blotting检测（BSA封闭后直接以市售的HRP-Streptavidin孵育， DAB显色），比较生物素化情况，选取适条件。由于Streptavidin与Biotin结合力*，因而用于Western Blotting检测时，只需很少生物素化蛋白即可观察结果。

 Q：如果我的底物蛋白浓度相当低且不容易浓缩，进行生物素化时该怎么办？

          A:在进行相同底物量的酶促反应时加入更多的酶并适当延长反应时间。但有一个问题不容忽视，酶是蛋白质，在酶量增加的时候，引入体系中的蛋白量亦增加了，如果后续的实验不容许出现很大量杂蛋白，那么延长反应时间将是仅有的选择。

Q：是否有阳性对照可以参考？

  A:有阳性对照（BIS-300阳性对照底物试剂盒）

   BIS-300试剂盒包含*生物素化的MBP-AviTag™融合蛋白标准品和未生物素化的MBP-AviTag™融合蛋白，可用作BirA生物   素连接酶作用下蛋白生物素化程度的比较，用于SDS-PAGE凝胶分析或蛋白质印迹分析。

avidity BirA生物素蛋白连接酶说明书

BirA500-BirA500：BirA生物素-蛋白质连接酶标准反应试剂盒，250.00美元

BirA生物素蛋白连接酶（EC 6.3.4.15）激活生物素形成5'-腺苷酸生物素，并将生物素转移至生物素受体蛋白（例如AviTag™肽）。它还起着生物素操纵子阻遏物的作用。该蛋白质由birA基因编码。

请注意：我们强烈建议使用AviTag™氨基酸序列，而不是其他生物素化肽序列。BirA酶以2倍于天然底物（BCCP）的反应速率对AviTag™序列进行生物素化处理，并且比使用中的其他肽序列高出一个数量级或更多。与其他Biotinylation-of-Peptide序列相比，AviTag™需要较少的酶量和较短的孵育时间，从而大程度地减少了与蛋白酶和蛋白质不稳定性相关的辅助问题。

产品信息

套件随附以下内容：

• 两（2）个小瓶，每瓶20uL 1mg / mL BirA生物素蛋白连接酶（总共40ug）
• 两（2）个每瓶1.5mL的BiomixA（0.5M Bicine缓冲溶液，pH 8.3）
• 两（2）个每瓶1.5mL的BiomixB（100mM ATP，100mM Mg（OAc）2、500uM d-生物素）
• 两（2）个每小瓶1.5mL的BIO-200（500uM d-生物素）

BirA生物素蛋白连接酶（EC 6.3.4.15）通过ATP中间体（生物素5'-腺苷酸）以高效，针对性的方式将d-生物素共价添加到生物素受体肽/蛋白质上。酶促生物素化蛋白的下游应用是多种，重要和强大的。通常利用*的生物素-亲和素/链霉亲和素相互作用来进行亲和层析或将蛋白质固定在表面或底物上。通过抗生物素抗体或抗生物素蛋白/链霉亲和素-报告酶偶联物（-HRP，-碱性磷酸酶）或荧光探针进行蛋白质检测成为可能。生物素化的MHC分子的多聚体形式是免疫生物学中流行的工具。

当与我们的AviTag™生物素受体肽氨基酸序列结合使用时，生物素化作用是天然大肠杆菌BCCP底物的两倍，并且比其他肽序列生​​物素化作用高一个数量级或更多。因此，与其他可用序列相比，AviTag™序列需要更少的BirA酶和较短的孵育时间即可完成生物素化反应。如果需要考虑蛋白质的不稳定性或蛋白酶活性，这对于下游的成功可能很重要。

我们的BirA酶是野生型大肠杆菌，由birA基因编码，并通过传统方法纯化至纯度超过99％。该酶的其他名称包括：生物素连接酶；生物素操纵子阻遏蛋白 birA; 生物素全酶合成酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；生物素-[乙酰-CoA-羧化酶]连接酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；生物素：脱羧羧化酶连接酶；生物素全酶合成酶；HCS。