荧光标记 rBC2LCN（AiLecS1）
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未分化人ES/iPS细胞检测试剂
仅需添加培养液便可检出人ES/iPS细胞！
荧光标记 rBC2LCN（AiLecS1）
◆rBC2LCN（AiLecS1）
rBC2LCN（AiLecS1）是在伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cenocepacia）来源凝集素 BC2L-C 的 N末端域表达的重组凝集素。
由于 rBC2LCN 对存在于人ES/iPS细胞表面的足糖萼蛋白（Podocalyxin）上的粘蛋白样O-型糖链的H型3（Fucα1-2Galβ1-3GalNAc）具有高亲和力，因此可用作人 ES/iPS 细胞的未分化标志物。
本产品是荧光染色标记，能直接添加到人 ES/iPS 细胞的培养液中，实现未分化活细胞分析。 适用于未分化细胞检测用标记。可用于细胞染色，流式细胞仪。另外，使用本品持续培养数日已确认细胞无毒性。
我们供应绿色荧光标记（FITC），黄色荧光标记（Cy3），红色荧光标记（Cy5）的三种类型的系列商品。
◆特点
● 添加到培养基即可进行染色
● 无需固定细胞，活细胞也可直接进行明显染色
● 细胞毒性低，染色后也可培养
● 识别 Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA-3, SSEA-4 细胞表面存在的糖链
● 可用于细胞染色和流式细胞仪
◆产品概述
● 已进行无菌试验（0.1 μm 过滤器进行灭菌）
● PBS(-) 溶液
● 使用时稀释比
Live Cell Imaging 1：100～1,000
Flow Cytometry 1：100～1,000
● 激发波长/发射波长
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Excitation |
Emission |
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rBC2LCN-FITC |
495 nm |
520 nm |
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rBC2LCN-547 |
551 nm |
565 nm |
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rBC2LCN-635 |
634 nm |
654 nm |
◆使用方法
细胞染色
活细胞染色（Live Cell Imaging）
1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞
2. 每 1 mL 的培养基添加 1~10 μL 的荧光标记 rBC2LCN
3. 37℃，5％CO2 孵育 30 分钟。
4. 更换新的培养基或者 HBSS(+)。
5. 利用荧光显微镜观察
固定细胞染色
1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞
2. 除去培养基，用 HBSS(+) 洗净。
3. 添加 4%多聚甲醛（PFA）溶液，室温静置 10～20 分钟。
4. 除去 PFA 后，用 D-PBS(-) 洗净三次。
5. 添加 D-PBS(-)。
6. 每 1 mL 的 D-PBS(-) 添加 1～10 μL 荧光标记 rBC2LCN。
7. 37℃，5% CO2 孵育 30 分钟。
8. 更换 D-PBS(-)。
9. 利用荧光显微镜观察。
流式细胞仪
1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞。
2. 使用细胞分散液，分散成单细胞。
3. 将细胞分散液移至管内，1,000 rpm 离心 3 分钟。
4. 除去上清液，用 FCM Buffer* 重悬细胞，离心后，舍弃上清液。
* FCM Buffer： D-PBS(-)和HBSS(-)含有 10 mmol/L EDTA，1% BSA
5. 用 FCM Buffer 重悬出 5×106 cells/mL 的细胞悬浮液
6. 每 1 mL 细胞悬浮液，添加 1～10 μL 的荧光标记 rBC2LCN。
7. 室温，避光静置30分钟。
8. 1,000 rpm 离心三分钟，除去上清液。
9. 用 FCM Buffer 重悬细胞，离心后，除去上清液。
10. 适量的 FCM Buffer 再悬浮细胞。
11. 进行流式细胞术。
使用注意
1. rBC2LCN 染色可以维持 2~3天。
2. 使用含有血清的培养基可能使信号背景变高
3. 根据流式细胞仪进行细胞分选时，当细胞分散或 FCM 缓冲液的终浓度到达 10 μmol/L 时，请添加 Y-27632。
◆人iPS细胞的活细胞染色（Live Cell Imaging）
● 用 rBC2LCN-FITC， rBC2LCN-635 以及 Hoechst33342 对人 iPS 细胞 201B7 株进行染色处理。（无细胞固定）
（稀释倍数 1：1,000）
● 用 rBC2LCN-FITC、Tra-1-60、Tra-1-81、SSEA-4 对人 iPS 细胞 201B7 株进行染色处理。
2小时后确认染色图像。（未固定细胞）
（稀释倍数 1：100）
★ 与 Tra-1-60、Tra-1-81 相比较，rBC2LCN 的活细胞染色度更强。
★ 即使交换培养基，rBC2LCN 染色第二天后染色效果依然明显。
◆人ES细胞的活细胞染色（Live Cell Imaging）
使用 rBC2LCN-FITC 对人 ES 细胞 WA01 株进行染色（未细胞固定）。细胞的一部分无法维持未分化状态而进行分化。如果使用 rBC2LCN-FITC 对活细胞进行染色，以维持未分化状态部分已染色，而已分化部分未染色来进行区分。
＜数据提供 国家研究与发展公司先进工业科学和技术研究院 新药开发的基础研究部门恭子小沼老师，伊藤弦老师＞
◆人 iPS 细胞固定后染色
将人 iPS 细胞 201B7 株用多聚甲醛固定后，使用 rBC2LCN 和 DAPI 进行细胞染色。
对于人 iPS 细胞毒性评估
向人 iPS 细胞 201B7 株的培养液中分别添加其 1/1,000、1/100、1/50 量的 rBC2LCN-FITC，持续培养。其结果是，不存在 rBC2LCN-FITC 浓度对毒性影响，不同浓度的细胞增殖程度相同程度。
〔细胞株〕
人iPS细胞 201B7株
〔培养基组成〕
StemSure® hPSC培养基Δ+35 ng/mL bFGF
〔涂层〕
Matrigel® hESC-Qualified Matrix
〔细胞接种数目〕
4×104 cells/well（12孔板）
使用Flow Cytometry进行人iPS细胞分离
使用rBC2LCN-FITC及rBC2LCN-6547、rBC2LCN-635对人iPS细胞201B7细胞株和人正常二倍体成纤维细胞染色，进行流式细胞术。
实验结果：未分化的人iPS细胞与分化的人二倍体成纤维细胞成功分离。
◆产品列表
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产品编号 |
产品名称 |
等级 |
容 量 |
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180-02991 |
人iPS未分化标记染料rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC) rBC2LCN-FITC 【AiLecS1-FITC】 |
用于细胞染色 |
100 μL |
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186-03211 |
人iPS未分化标记染料rBC2LCN-547 (AiLecS1-547) rBC2LCN-547 【AiLecS1-547】 |
用于细胞染色 |
100 μL |
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185-03161 |
人iPS未分化标记染料rBC2LCN-635 (AiLecS1-635) rBC2LCN-635 【AiLecS1-635】 |
用于细胞染色 |
100 μL |
◆相关产品
★ rBC2LCN 剥离液 ★
本产品能够将结合在人ES细胞▪ 人iPS细胞表面糖链的 rBC2LCN 凝集素从细胞里面剥离出来。剥离 rBC2LCN 之后的细胞能够进行抗体染色，可以继续培养。
| 产品编号 | 产品名称 | 等级 | 规格 |
| 182-03171 |
rBC2LCN剥离溶液 rBC2LCN Stripping Solution 【AiWashS1】 |
用于细胞培养 | 10 mL |
★ BC2LCN 凝聚素，重组体、溶液未标识 rBC2LCN 系列
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产品编号 |
产品名称 |
等级 |
规格 |
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029-18061 |
BC2LCN （AiLecS1）凝集素 BC2LCN 【AiLecS1】 Lectin, recombinant, Solution |
糖链研究用 |
1 mg |
★ StemSure® hPSC 培养基Δ无饲养层细胞条件下可用于维持培养人多功能干细胞（ES/iPS细胞）的无血清液态培养基。原料不含动物体来源成分。
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产品编号 |
产品名称 |
等级 |
规格 |
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197-17571 |
StemSure人多能干细胞培养基 StemSure® hPSC Medium Δ |
用于细胞培养 |
100 mL |
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064-05381 |
成纤维细胞生长因子（碱性），人，重组，无动物衍生物 Fibloblast Growth Factor (basic), Human, recpmbonant, Animalderived-free 【bFGF/FGF2】 |
細胞生物学用 |
50 μg |
|
160-27051 |
hPSC解离溶液 hPSC Dissociation Solution 人类iPS細胞用单体细胞分散剂。 |
用于细胞培养 |
100 mL |
★ StemSure® 系列
已通过小鼠 ES 细胞 D3 株品质测验。
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产品编号 |
产品名称 |
等级 |
规格 |
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197-16275 |
StemSure D-MEM（高糖）含酚红和丙酮酸钠 StemSure® D-MEM with Phenol Red and Sodium Pyruvate |
用于细胞培养 |
500 mL |
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198-15781 |
StemSure10 mmol/L 2-巯基乙醇 StemSure® 10mmol/L 2-Mercaptoethanol Solution（×100） |
用于细胞培养 |
100 mL |
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195-15791 |
StemSure50 mmol/L 硫代甘油（×100） StemSure® 50mmol/L Monothioglycerol Solution（×100） |
用于细胞培养 |
100 mL |
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190-15805 |
StemSure 0.1w/v%明胶溶液 StemSure® 0.1w/v% Gelatin Solution |
用于细胞培养 |
500 mL |
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195-16031 |
StemSure干细胞冻存液 StemSure® Freezing Medium 含有BSA的ES细胞・iPS细胞冻存液 |
用于细胞培养 |
100 mL |
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197-17831 |
StemSure® 人多能细胞冻存液 StemSure® hPSC Freezing Medium, AF 无动物体成分的ES·iPS细胞冻存液 |
用于细胞培养 |
100 mL |
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199-16051 |
StemSure® 白细胞抑制因子溶液,小鼠，重组 StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution |
用于细胞培养 |
106 units |
● ES・iPS细胞研究用试剂
2007年iPS细胞确立发表后，许多与iPS细胞相关的文献纷纷发表。在各种各样的文献中报道出来的与ES细胞・iPS细胞的未分化能维持和分化诱导相关的低分子化合物也逐渐阵容化。
● 液态培养基・细胞培养用试剂
我们有着以液态培养基为首的平衡盐溶液、细胞剥离·分散液、抗生物质溶液、细胞外基质等丰富的产品种类。
参考文献
· Onuma, Y., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun., 431, 524, (2013).
· Tateno, H., et al.: Stem Cells Transl. Med., 2, 265, (2013).
· Tateno, H., et al.: Sci. Rep., 4, 4069, (2014).
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