MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS
适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒
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MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS
适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒
外泌体等细胞外囊泡（EV: Extracellular Vesicle）不仅参与排放生物体内的废弃物，同时也是细胞间的通信媒介。根据分泌的细胞不同，EV的特性及其内含物（核酸、蛋白质、脂质等）也有所差异，目前正在尝试将参与疾病的细胞来源EV及其内含物作为生物标记应用于“液体活检”，即通过体液样品诊断疾病。
为实现液体活检的开发和应用，需要从大量的样品中高效地分离和纯化EV。但超速离心法等传统方法单次可处理的样品数有限，从多个样品中分离和纯化EV需要花费庞大的人力和物力。
因此，FUJIFILM Wako开发了EV分离纯化用试剂盒MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS，适用于提取核酸和蛋白质的自动提取设备（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。本试剂盒采用与金泽大学的华山教授共同开发的EV分离纯化技术“PS亲和法”1），配合自动提取设备，可同时分离和纯化高纯度且低损伤EV的样品上限为96份。
◆产品概要
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS是使用PS亲和法分离和纯化细胞外囊泡（EV）的试剂盒，适用于自动提取设备（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。由于可从多达96份样品中分离和纯化EV，因此也适用于利用EV进行生物标记的探索和高通量筛选 (High-throughput screening，HTS) 。
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特点 ● 配合自动提取设备，同时可分离和纯化EV的样品上限为96份 ● 使用自行研发的分离纯化技术“PS亲和法”，可分离高纯度且低损伤 的EV。 |
适用样品（示例） ● 细胞培养上清 ● 血清 ● 血浆 ● 尿液 ● 唾液 |
适用自动提取设备（分离成果经FUJIFILM Wako验证的设备）
● KingFisher™ Flex（Thermo Fisher Scientific等）
与手动款试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）的区别
比较本试剂盒与手动分离纯化试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2, 产品编号：290-84103），两者的区别如下表所示。另，EV的回收效率基本持平。（参考“性能数据”）
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自动提取 （MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS） |
手动提取 （MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2） |
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Tim4和磁珠的结合方法 |
直接与磁珠结合 |
通过生物素-亲和素系统与磁珠结合 |
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洗脱缓冲液中的表面活性剂浓度 |
高 （抑制了磁珠的损耗） |
低 |
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洗脱缓冲液中的EDTA浓度 |
高 （减少了洗脱步骤的次数） |
低 |
◆原理
PS亲和法是FUJIFILM Wako研发的EV分离方法，使用了与存在于EV表面的磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合的Tim4。
通过PS-Tim4结合的高特异性和螯合剂，可在完整状态下温和地洗脱高纯度EV。
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特异性结合
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洗脱
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◆实验方案
使用KingFisher™ Flex分离纯化EV（进行从亲和反应到洗脱一系列过程时）
※将亲和反应和洗脱步骤作为单独的程序分别进行，并使用新的tip comb进行洗脱，可能可以减少样品中的杂质。更多信息请参阅使用说明书。
实验方案的详细内容和设置示例请查阅使用说明书。
◆数据
与手动试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）比较的性能数据
通过NTA，比较分离的粒子数
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto，自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual，手动提取)，从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清（COLO201）中分离和纯化EV。通过Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)确认EV的粒子数
【结果】
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒获得了相同程度的粒子数。
通过ELISA，比较分离的粒子数
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手动提取)，从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清（COLO201）中分离和纯化EV。然后使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) （产品编号：298-80601）确认EV的回收率。
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【结果】
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒获得了相同程度的回收率。
通过蛋白质组学分析，比较分离的蛋白质种类、蛋白量
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手动提取)分离和纯化EV。蛋白质组学分析回收的EV溶液。
（1）鉴定的蛋白质种类
【结果】
在4次实验中，MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS与手动试剂盒相比，鉴定的蛋白质数量始终更多、再现性更高。
（2）EV标记蛋白质的量
【结果】
分别使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒进行分离的EV中所含的EV标记蛋白质之间并无显著差异，自动化对EV的回收率没有影响。
（3）非EV标记的量（以白蛋白为例）
【结果】
与手动试剂盒相比，使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS纯化分离的非EV标记物白蛋白量更少，表明可回收杂质更少的EV。
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参考文献
1） Nakai, W. et al.: Sci. Rep. 6(1), 1(2016).
A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 293-96401 | MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS HTS用MagCapture™ EV提取试剂盒PS |
96 tests | 基因研究用 | – |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 294-84101 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS Ver.2 |
2 tests | 基因研究用 | – |
| 290-84103 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS Ver.2 |
10 tests | 基因研究用 | – |
| 适用于从10 mL以下的细胞培养上清以及体液样品中分离和纯化EV |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 131-19491 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化分离柱 PS |
1 mL | 基因研究用 | – |
| 137-19493 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化分离柱 PS |
5 mL | 基因研究用 | – |
| 295-96601 | MassivEV™ Purification Buffer Set MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化缓冲液套装 |
1mL×10回用 (5mL×2回用) |
基因研究用 | – |
| 适用于从10 mL至公升级别规模的细胞培养上清中分离和纯化EV |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 058-09261 | EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（超滤用） |
1 mL | 基因研究用 | – |
| 050-09461 | EV-Sav™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent for in vivo EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（动物体内实验用) |
1 mL | 基因研究用 | – |
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