意大利DIATHEVA致力于开发，生产和营销用于诊断，研究和治疗应用的新型和创新产品：癌症，微生物感染和药物遗传学，提供各种用于HIV-I研究的试剂和试剂盒，用于个性化的药物遗传学测试和预测医学以及食品安全的创新解决方案。

 

PBRT 2.0 kit – PCR based replicon typing – New replicons P1, N2, FIB-KN, FIB-KQ, X4

PBRT2.0试剂盒-基于PCR的复制子分型-新的副本P1，N2，FIB-KN，FIB-KQ，X4

PBRT2.0试剂盒用于肠杆菌科细菌耐药质粒的分子分型。

介绍

 

耐药性质粒的流行病学是描述耐药性扩散的一个主要问题。质粒可以根据亲缘关系划分为家族。目前，利用PCR技术对质粒进行分子鉴定和分类是可能的，它的基础是检测质粒复制控制(复制)，即大的部分， 天然存在的质粒编码复制酶基因(REP)和顺式调节元件，控制质粒DNA复制和拷贝数。大多数复制者都是妖魔化的。 与质粒不相容有关(Couturier等人)。，因此，对其中一个复制子的检测可能被解释为该质粒的临时分子分配给它的respec。 公司集团基于pcr的复制子分型(Pbrt)是一种有效的肠杆菌科质粒鉴定和分型方法，是由英国国立卫生研究院的研究主任亚历山德拉卡拉托利(Alessandra Carattoli)开发的。 e意大利罗马国家卫生研究所(Carattoli等人)。(2005年)，随后由Diadiva工业化，。2005年PBRT方案在8个PCR反应中检测到18个重复。近， 新的复制子和质粒类型的鉴定要求更新PBRT方案。pbrt2.0系统是一种基于PCR的检测方法，它允许快速、简便地对质粒进行定性和分子分析。 R识别通过副本检测。该系统结合一种方便的格式，代表了一种有效的测试广泛细菌菌株的工具，并被广泛用于p的分类。 “在不同国家和环境中传播耐药性决定因素之后”(Carattoli A.等人，2009年)。PBRT2.0试剂盒提供了一套新的8s检测方法 经优化的8种多重PCRS扩增方法：HI1，HI2，I1，I2，X1，X2，X3，X4，L，M，N，FIA，FIB，FIC，FII，FIIs，Fiik，FIB KN，FIB KQ，W，Y ，P1，A/C，T，K，U，R，B/O，HIB-M和FIB-M，代表主要质粒不亲和群和在肠杆菌科细菌间循环的抗性质粒上鉴定的复制酶基因(Carattol)。 我等人。2005年，GarcíaFernández。等人2009年。加西亚-费尔南德斯。等人2012年，Villa等人。2010年)。表中提供了参考质粒的列表，其中包括PBRT试剂盒检测到的每个复制子的一个。 下面是相关公司集团的指示。未分配给任何已知的Inc组的复制图标在下表中报告为“未分配”。所有呼吸的阳性对照 ctive复制图标包含在工具包中。

 

 

工具包内容

 

1倍聚合酶链反应m1：600μl

 

1 xPCR混合M2：600μl

 

1倍聚合酶链反应M3：600μl

 

1倍聚合酶链反应M4：600μl

 

1倍聚合酶链反应M5：600μl

 

1倍聚合酶链反应M6：600μl

 

1倍聚合酶链反应m7：600μl

 

1倍聚合酶链反应m8：600μl

 

1x阳性对照M1：冻干-15μl

 

1x阳性对照M2：冻干-15μl

 

1x阳性对照m3：冻干-15μl

 

1x阳性对照m4：冻干-15μl

 

1x阳性对照m5：冻干-15μl

 

1x阳性对照m6：冻干-15μl

 

1x阳性对照m7：冻干-15μl

 

1x阳性对照M8：冻干-15μl DNA聚合酶(5U/ml)：40ml(200 U)

 

免费水：1000μl

其他所需用品-·

 

一次性乳胶手套。·

 

精密吸管。

 

·无菌针尖。

 

·无菌1.5ml小瓶和0.2mlPCR无菌小瓶。·

 

台面离心机。

 

在室温下装运条件对该组件的性能没有不利影响。

 

将试剂盒存放在-20°C处，应避免反复冻融。对于停止使用混合存储在工作别名是建议的。

 

PCR的一般预防措施

 

操作人员应始终注意：·保持严格分开的工作区域进行dna的提取和·的建立·使用带过滤器的吸管提示；·储存阳性材料(标本，对照)。 (和放大器)与所有其他试剂分开，如果可能的话，将其加入到分离空间中的反应混合物中；在启动之前，·在室温下解冻所有的组分和样品。 assay; ·

 

冰上工作

 

重要事项

 

PBRT2.0试剂盒已在从不同样本中分离出的大量细菌菌株上根据制造商说明书进行了验证。已经证明*的引入 协议中的内容(例如，使用较少体积的母料)可能导致某些质粒放大失败。

 

 

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