从植物组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Plant RNA

　　ISOSPIN Plant RNA用于从植物组织提取和纯化RNA。本产品的原理是在离液剂离子条件下，RNA吸附于二氧化硅。无需苯酚和氯仿等有毒有机溶剂。所使用的离心柱最大限度地确保了柱容积，内封的硅胶模确保足够的RNA吸附容量和高洗脱率。
　　本试剂盒采用离心法去除杂物，在硅胶模上进行 DNase I 处理，提取和纯化高纯度RNA用时仅约１小时。

◆特点

　　•　高纯度 RNA

　   　  离心法去除杂物和硅基质膜上的 DNase I 处理能提取出高纯度RNA。

　　•　无需使用过滤器

　   　  无需使用过滤器样品均匀化或过滤时后。本试剂盒用离心法去除杂物沉淀。

　　•　无需苯酚、氯仿

　    　 无需使用苯酚、氯仿等有毒有机溶剂。

　　•　包装附有 DNase I

　    　 试剂盒内含有 DNase I （RNase free），不需另外购买。

◆产品列表

ISOSPIN Plant RNA (50次用量)
产品	容量	保存	备注
PT Extraction Buffer	30 mL x 1支	室温
PT Binding Buffer	40 mL x 1支	室温	含乙醇
PT Wash1 Buffer	40 mL x 1支	室温	含乙醇（清洗液）
PT Wash2 Buffer	40 mL x 1支	室温	含乙醇（清洗液）
DNase I (RNase free)	2,000 units x 1支	-20°C
10× DNase I Buffer	1 mL x 1支	-20°C
ddWater (RNase free)	1 mL x 8支	室温	调制DNase I 溶液・洗提
离心柱	50 支 x 1袋	冷藏	上端组成：吸附柱 下端组成：收集管

运送方法

　　NIPPON GENE提供直送服务，将室温品和冷藏品的试剂盒、－20°C的产品、放入干冰的泡沫箱一同放入纸箱，在常温下进行运输。

◆使用实例

Data.1　RNA的回收量标准

　　本产品可提取的RNA的回收量标准如下表。

样品

菠菜（叶）	0.5 μg RNA/mg 组织
青花菜（芽）	1.0 μg RNA/mg组织
卷心菜（种子）	1.3 μg RNA/mg组织
卷心菜（芽）	1.4 μg RNA/mg组织
卷心菜（叶）	0.1 μg RNA/mg组织
竹子（叶）	0.3 μg RNA/mg组织
郁金香（球根）	0.2 μg RNA/mg组织

Data.2　从卷心菜（十字花科）种子及从叶子提取RNA

　　使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品按照步骤提取卷心菜的种子（约 4 mg）和叶（约 30 mg）的RNA。用吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板逆进行转录，使用GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX对获得的cDNA进行实时qPCR。

实验条件

1.  样品量
　　・种子（约4 mg）
　　・叶（约30 mg）

2.  变性凝胶电泳
　　・凝胶：1% Agarose S（甲醛变性）
　　・RNA添加量：种子（1 μg）/叶（0.5 μg）
　　・RNA Ladder：与RNA添加量等量

3.  实时qPCR
　　・试剂：GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX
　　・装置：ABI 7500 Fast
　　・模板cDNA：以提取出的总RNA为模板进行逆转录
　　・扩增片段长度：441 bp
　　・实验次数： n=3

结果

　　从吸收光谱结果看，在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低，说明本产品更能有效去除多糖类杂物（图1）。

卷心菜种子	卷心菜叶
图1 吸收光谱

		【RNA添加量】 　　种子（1 μg）／叶子（0.5 μg） 【Marker】 　　RNA Ladder(与RNA的添加量等量) 　　1% Agarose S（甲醛变性）
图2 变性凝胶电泳

卷心菜种子	卷心菜叶
图3 实时qPCR

【试剂】 　　GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX 【模板】 　　以提取出的总RNA为模板进行逆转录 【装置】ABI 7500 Fast 【扩增片段长度】441 bp 【循环数】n=3

红色：　ISOSPIN Plant RNA 绿色：　A公司产品

Data.3　从竹子（禾本科）愈伤组织提取RNA

竹子愈伤组织

（淡竹培养细胞系Pn(rpc00047)形成）

　　

使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品，按照步骤对各样品量竹子愈伤组织提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆转录，使用 GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX 对获得的 cDNA 进行实时 qPCR。

　　※本实验使用的竹子愈伤组织由富山县立大学荻田信二郎博士（现公立大学法人县立广岛大学）提供。竹子愈伤组织委托理化学研究所 BioResource Center 获得的淡竹培养细胞系Pn（rpc00047）培养形成的。

实验条件

1.  样品量
　　①　约 65 mg
　　②　约 50 mg
　　③　约 40 mg

2.  琼脂糖凝胶电泳
　　・凝胶：0.8% 琼脂糖 S/TAE
　　・RNA添加量：最终提取量的1/10（5 μL）
　　・Marker：OneSTEP Marker6（5 μL）

3.  实时qPCR
　　・试剂：GeneAce SYBR^® qPCR Mix α Low ROX
　　・装置：ABI 7500 Fast
　　・模板cDNA：以提取的总RNA为模板进行逆转录
　　・扩增片段长度：197 bp
　　・循环数： n=3

结果

　　从吸收光谱结果看，在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低，说明更能有效去除多糖类杂物（图1）。根据琼脂糖凝胶电泳比较结果显示，ISOSPIN Plant RNA更有效提取出RNA（图2）。

图1 吸收光谱	图2 变性凝胶电泳

【凝胶】 　　0.8% 琼脂糖 S/TAE

【RNA添加量】 　　最终提取量的1/10（5 μL）

【Marker】 　　OneSTEP Marker6（5 μL）

	【试剂】GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX 【装置】ABI 7500 Fast 【模板cDNA】以提取出的总RNA为模板进行逆转录 【扩增片段长度】197 bp 【循环数】n=3
图3 实时qPCR

Data.4　从郁金香（百合科）球根中提取RNA

　　  　

提取液的粘性状态
左：ISOSPIN Plant RNA
右：B公司产品

　　使用 ISOSPIN Plant RNA 与B公司产品，按照步骤对郁金香球根（100 mg）提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆转录，使用 GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX 对获得的 cDNA 进行实时qPCR。

　　郁金香球根样品粘性高，提取困难。郁金香球根在液氮中碎成粉末状后，取1.5 mL移至离心管，并在各公司提取Buffer中用研磨棒磨碎，右图将离心管倒置比较溶液的粘性。

实验条件

1.  样品量

　　100 mg

2.  琼脂糖凝胶电泳
　　RNA添加量：最终提取量的1/10（5 μL）

结果

　　ISOSPIN Plant RNA 也能从粘性高的郁金香球根提取出RNA。

	最终提取量的1/10（5 μl）
图1吸收光谱	图2 琼脂糖凝胶电泳

◆备注

　　

　　·　本产品仅用于实验研究，不能作医药及其他目的使用。

◆资料 Data Sheet

产品指南

　　·ISOSPIN Plant RNA(PDF 299KB)

SDS(Safety Data Sheet)

　　·ISOSPIN Plant RNA (PDF)

宣传册子

　　·ISOSPIN Plant RNA宣传册子（PDF 2.7MB）

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　　·ISOSPIN Cell & Tissue RNA （提取动物细胞、动物组织的RNA）

　　·ISOSPIN Plasmid （提取大肠杆菌质粒）

　　·ISOSPIN PCR Product （纯化PCR产物）

　　·ISOSPIN Agarose Gel （纯化琼脂糖凝胶的DNA）

　　·ISOSPIN Blood & Plasma DNA （提取血液、血清、血浆的DNA）

从动物细胞和组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Cell & Tissue RNA

◆特点

•　高纯度RNA

 离心法去除杂物和硅基质膜上的DNase I 处理能提取出高纯度RNA。

•　无需使用过滤器进行前处理

 无需使用过滤器对样品均匀化或过滤。本试剂盒用离心法去除杂物沉淀。

•　无需苯酚、氯仿

 无需苯酚、氯仿等有毒有机溶剂。

•　包装附有DNase I

 试剂盒内含有DNase I （RNase free），无需另外购买。

◆产品列表

ISOSPIN Cell & Tissue RNA (50次用量)

产品	包装	保存	备注
PT Extraction Buffer（组织用）	30 mL × 1 支	室温
C Extraction Buffer（细胞用）	30 mL × 1 支	室温
PT Binding Buffer	40 mL × 1 支	室温	含有乙醇
PT Wash1 Buffer	40 mL × 1 支	室温	含有乙醇（清洗液）
PT Wash2 Buffer	40 mL × 1 支	室温	含有乙醇（清洗液）
DNase I (RNase free)	2,000 units × 1 支	－20°C
10× DNase I Buffer	1 mL × 1 支	室温/ －20°C
ddWater (RNase free)	1 mL × 8 支	室温	配制DNase I 溶液・洗脱
Spin Column	50 支 × 1 袋	冷藏	上端组成：吸附柱 下端组成：收集管

运送方法

NIPPON GENE 提供直送服务，将室温品和冷藏品的试剂盒、－20°C的产品、放入干冰的泡沫箱一同放入纸箱，在常温下进行运输。

◆使用实例

步骤

　　动物培养细胞：往动物细胞（不超过3×10⁶ cells）里加入600 μL的C Extraction Buffer（细胞用），用移液器溶解细胞。

　　动物组织： 取新鲜动物组织（不超过10 mg）或冷冻组织置于1.5 mL微量离心管，加入600 μL PT Extraction Buffer（组织用），直接用研磨

                         杵捣碎。涡旋30 秒以上。

　　▶　提取步骤如下：

Data 1　RNA的回收量标准和吸光谱

RNA的回收量标准

HeLa细胞	15 μg RNA/106 cells
Jurkat细胞	10 μg RNA/106 cells
Vero 细胞	15 μg RNA/106 cells
小鼠脑	1.0 μg RNA/mg tissue
小鼠肝脏	3.5 μg RNA/mg tissue
小鼠肾脏	3.0 μg RNA/mg tissue
小鼠精巢	1.5 μg RNA/mg tissue

RNA的吸光度

Data 2　从培养细胞（HeLa）中提取RNA

1%凝胶琼脂糖 S

右端: Marker 6

泳道 1, 2, 3

各0.5μg

　　从1×10⁶ 个HeLa细胞中提取出RNA后，进行吸光值测定和电泳（n = 3）。

260/280	260/230	µg/106 cells
2.035±0.019	2.254±0.028	19.30± 4.69

◆备注

　　本产品仅用于实验研究，不能作医药及其他目的使用。

◆资料 Data Sheet

产品指南

　　·　ISOSPIN Cell & Tissue RNA（PDF 356KB）

SDS(Safety Data Sheet)

　　·　ISOSPIN Cell & Tissue RNA (PDF)

宣传册子

　　·　ISOSPIN Cell & Tissue RNA　手册（PDF 1MB）

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　　·　ISOSPIN PCR Product （PCR产物的纯化）

　　·　ISOSPIN Agarose Gel （琼脂糖凝胶中DNA的纯化）

　　·　ISOSPIN Blood & Plasma DNA （从血液、血清、血浆中提取DNA）

Q：与RNA提取试剂 ISOGEN 的使用区别是？

A：两者有以下的区别，请根据实验目的进行选择。

　　•　ISOGEN 含有苯酚等抑制RNase活性的成分，样品溶液（匀浆）可中途冷冻保存。
　　•　虽然在步骤过程中，不可保存ISOSPIN Cell & Tissue RNA，但无需苯酚、氯仿等有毒有机溶剂。

　　•　ISOGEN 是在溶液分层后使用乙醇沉淀提取RNA，能简单地扩大提取。
　　•　ISOSPIN Cell & Tissue RNA 使用离心柱进行提取，操作简单，适合多样品处理。

Q：用 RNA later^®（RNA稳定剂）保存的样本也可使用本试剂盒提取RNA吗？

A：可以提取。