上海金畔qiagen 30210现货说明书
Ni-NTA Agarose
For purification of His-tagged proteins by gravity-flow chromatography
Cat. No. / ID: 30210
Ni-NTA琼脂糖用于分子生物学应用。本产品不用于诊断、预防或治疗疾病。
特征
从粗裂解物一步纯化至>95%纯蛋白
高结合亲和力和高容量
选择天然或变性条件下的纯化
预充电、随时可用的基质，用于任何规模的纯化
自动化纯化和分析协议
产品详细信息
Ni-NTA琼脂糖是一种亲和层析基质，用于纯化携带His标签的重组蛋白。His标签中的组氨酸残基以高特异性和亲和力结合到固定化镍离子的配位域中的空位。清除的细胞裂解物被装载到基质上。他的标记蛋白被结合，其他蛋白通过基质。洗涤后，His标记的蛋白质在天然或变性条件下在缓冲液中洗脱。
Ni-NTA琼脂糖
用于蛋白提取
用于蛋白提取
Ni-NTA琼脂糖
本产品可用于亲和提取在N末端或C末端融合了带有六个组氨酸残基的6×His标签的重组蛋白。它用于提取多种蛋白质，如可溶性蛋白质，不溶性蛋白质，膜蛋白质等等。溶出时无需使用多肽，以低成本和简单的操作即可提取目的蛋白。
◆特点
● 具有高性价比
● 可再生利用
◆产品规格
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凝胶基质 |
6％ 交联琼脂糖 |
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配体 |
次氮基三乙酸（NTA） |
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Beads size |
50-150 μm |
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蛋白结合容量 |
>50 mg/mL 凝胶 |
*蛋白结合容量会因目的蛋白不同而有所差异。
◆数据
可以与其他公司的产品回收等量的蛋白质。
<实验条件>
① 通过超声破碎法从大肠杆菌中回收6×组氨酸融合GFP，作为精制前样本。
② 将Ni–NTA柱连接到液相色谱系统。
③ 用150 mL Running Buffer*1平衡色谱柱。
④ 上样精制前样本。
⑤ 用100 mL Running Buffer清洗。
⑥ 用150 mL Elution Buffer*2洗脱。
⑦ 用100 mL Running Buffer清洗。
⑧ 进行SDS-PAGE、CBB染色。
＊1 Running Buffer：20 mmol/L Sodium Phosphate（pH 7.4），
500 mmol/L Sodium Chloride,
10 mmol/L Imidazole
＊2 Elution Buffer：20 mmol/L Sodium Phosphate（pH 7.4）,
500 mmol/L Sodium Chloride,
10~500 mmol/L Imidazole
具体实验条件请根据精制的目的蛋白进行检讨。
◆产品列表
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产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
|
147-09761 |
Ni-NTA Agarose |
基因研究用 |
2 mL（Net 1 mL） |
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143-09763 |
10 mL（Net 5 mL） |
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141-09764 |
100 mL（Net 50 mL） |
◆相关产品
预装型
本产品是预装柱产品。可直接用于液相色谱系统。
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产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
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146-09731 |
Ni-NTA Cartridge |
基因研究用 |
1EA（5 mL） |
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142-09733 |
1EA（5 mL）×5 |
高性能型
具有高蛋白结合能力的高性能型Ni-NTA琼脂糖。
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产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
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149-09684 |
Ni-NTA Agarose HP |
基因研究用 |
2 mL（Net 1 mL） |
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145-09681 |
10 mL（Net 5 mL） |
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|
141-09683 |
100 mL（Net 50 mL） |
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
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biotechrabbit Tris-NTA 生物素说明书
三个 Ni-NTA 基团的复合物确保 His 标签的高亲和力结合
结合亲和力比单价金属离子螯合剂高大约四个数量级
蛋白质结合是化学计量的
蛋白质或细胞表面的可逆标记
目标分子的检测和分析
将蛋白质、脂质和细胞固定在表面上
蛋白质的纯化和样品制备
与显微镜或光谱探头耦合
His标签是蛋白质表达分析中常用的标签之一。传统的金属离子螯合剂，如次氮基三乙酸 (NTA) 和亚氨基二乙酸 (IDA)，以 10 µM 范围内的低亲和力结合 His 标签。biotechrabbit Tris-NTA 复合了三个 NTA 基团，它们一起结合一个 6×His 标签，其亲和力比传统螯合剂 (10 µM) 高四个数量级 (1 nM)。His标签的结合是化学计量的，单分子检测是可能的。结合是可逆的：结合的 His 标签可以用咪唑或乙二胺四乙酸 (EDTA) 释放。
biotechrabbit™ Tris-NTA 可提供游离胺基团或与生物素结合。它可用于广泛的应用，包括蛋白质检测和标记、蛋白质、脂质或细胞与表面的偶联、蛋白质纯化和可逆的蛋白质修饰。
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零件 |
作品 |
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Tris-NTA 生物素 |
PBS 中的 Tris-NTA 生物素 (1 mg/ml) |
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贮存 |
4°C（直到有效期 – 见产品标签） |
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化学名称 |
生物素-Tris-NTA（三氟y酸盐） |
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稳定 |
24 个月 |
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储存条件 |
储存于 4°C |
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确定身份的方法 |
高效液相色谱，质谱 |
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CAS 号码 |
免费碱基：1070867-85-4 |
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分子式 |
游离碱：C59H93N11O25S |
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分子量 |
自由碱基：1388.49 |
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来源 |
合成的 |
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纯度 |
>95%（高效液相色谱法） |
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形式 |
1 毫克/毫升 PBS 溶液 |
| 目录 ＃ | 尺寸 | 包装内容 |
|---|---|---|
| BR1001201 | 1毫克 | 1 毫升 Tris-NTA 生物素 |
| BR1001202 |
1毫升 Tris-NTA 生物素 1毫克 |
proteinslides Ni-NTA或Cu-NTA表面
应用说明：
蛋白质分子仅通过具有受控方向的poly-His标签连接到表面，否则将尽可能远离表面。这确保了天然状态的蛋白质活性。无需样品预纯化。
| 图1.零背景Cu2 +表面由束缚在高密度PEG涂层上的螯合Cu2 +离子组成。蛋白质分子通过多组氨酸标签特异性连接。 |
重组蛋白通常与聚组氨酸（His）标签一起产生，以促进纯化。这些蛋白质现在用于蛋白质微阵列的制造中。为了利用poly-His标签的可利用性，我们基于零背景PEG涂层开发了一种螯合的Cu2 +表面，如图1所示。该表面的使用基本上省去了纯化步骤，并将其直接掺入了蛋白质固定化过程，即可以将粗裂解物直接用于微阵列制造，如图2所示的绿色荧光蛋白（GFP）。除了N末端或C末端的多组氨酸标签外，由于PEG环境的排斥性，每个固定的蛋白质分子都远离表面并使其与表面的相互作用小化。结果是，对蛋白质天然构象的干扰小。化学环境的惰性和可控的取向都为固定的蛋白质分子保留其天然构象和活性提供了理想的环境，如图3所示。对于6xHis标记的磺基转移酶和碱性磷酸酶，可控的取向固定在Cu2 + / PEG表面，其活性与溶液相几乎相同。为了进行比较，以无规取向固定在3-氨丙基三乙氧基硅烷（γ-APS）涂层表面上的酶仅显示约10％的活性。化学环境的惰性和可控的取向都为固定的蛋白质分子保留其天然构象和活性提供了理想的环境，如图3所示。对于6xHis标记的磺基转移酶和碱性磷酸酶，可控的取向固定在Cu2 + / PEG表面，其活性与溶液相几乎相同。为了进行比较，以无规取向固定在3-氨丙基三乙氧基硅烷（γ-APS）涂层表面上的酶仅显示约10％的活性。化学环境的惰性和可控的取向都为固定的蛋白质分子保留其天然构象和活性提供了理想的环境，如图3所示。对于6xHis标记的磺基转移酶和碱性磷酸酶，可控的取向固定在Cu2 + / PEG表面，其活性与溶液相几乎相同。为了进行比较，以无规取向固定在3-氨基丙基三乙氧基硅烷（γ-APS）涂层表面上的酶仅显示约10％的活性。
| 图3.溶液相中酶活性与在γ-APS表面上随机取向或在Cu2 + / PEG表面上受控取向的酶活性的比较。 | 图2.左侧显示了吸附在螯合的Cu2 + / PEG表面的6xHis标签的GFP的固有荧光。该表面可抵抗没有His标签的GFP的非特异性吸附（右）。光斑直径约0.2毫米。 |
Cu2 + / PEG表面上的排斥性2D化学环境不仅对固定化蛋白分子的活性至关重要，而且对维持和恢复这种活性也至关重要。后者在固定在三个不同表面上的6xHis-GFP变性和重新折叠的重复循环后的荧光显微镜图像中得到证明（图4）：（a）Cu2 + / PEG表面；（b）Cu 2+离子螯合在3-氨基丙基三乙氧基硅烷（gama-APS）功能化表面的表面亚氨基二乙酸基团上；（c）用于非特异性蛋白质吸附的γ-APS表面。尽管免疫染色显示相似量的GFP，但三个表面的固有荧光强度却有很大差异。Cu2 + / gamma-APS或gamma-APS表面的荧光强度为70％或< Cu 2+ / PEG表面的20％。尽管在变性步骤之后所有三个表面上均未检测到荧光，但重新折叠的结果是表面化学性质的强函数。在Cu2 + / PEG表面上，大多数荧光强度在重折叠步骤后得以恢复。相反，Cu2 + /γ-APS或γ-APS表面几乎没有荧光强度。在Cu2 + / PEG表面上，每个固定的GFP分子仅通过6xHis标签连接，但由于PEG功能的排斥性，更倾向于远离表面。表面的这种排斥或不结垢的性质确保了弱的蛋白质-表面相互作用不会在能量格局中为蛋白质重新折叠引入额外的障碍。在gamma-APS表面上，GFP与附近的“粘性”或结垢–NH2官能团之间存在吸引人的非特异性相互作用。变性后，与粘性环境的这种非特异性相互作用有望增加，从而有效地在能量格局中引入了无法克服的障碍，从而使蛋白质重新折叠。Cu2 + / PEG表面对蛋白质分子进行芯片重折叠的能力为许多潜在应用打开了大门，例如，直接在芯片上生成蛋白质微阵列，从重组蛋白质中去除包涵体等。这些涂层可供选择在标准显微镜载玻片，盖玻片和硅片上。我们的客户已成功将Cu2 + / PEG表面应用于各种应用，包括蛋白质传感器，蛋白质微阵列，单分子光谱，生物原子力显微镜和其他生物物理研究。即将推出：Cu2 + / PEG表面的三维（3D）版本正在开发中。微孔3D涂层提供的大表面积允许高聚His标签探针分子的高负载。这是检测极低浓度生物标志物的理想选择。
| 图4.在三个表面上变性（De）和再折叠（Re）循环前后的6xHis-GFP荧光显微镜图像：（a）Cu2 + / PEG；（b）Cu2 //γ-APS；（c）γ-APS。变性涉及将6xHis-GFP涂层的表面浸入pH = 3.5的缓冲溶液中，而重新折叠对应于将样品与含有1xPBS，20％蔗糖和10％甘油的pH = 8.1的缓冲溶液一起孵育。 |
阅读使用我们的Cu2 +表面发表的文章：蛋白质组学，2005，5，416；蛋白质组学，2007，7，1771; 自然方法，2008，5，507; BMC Biotech。，2009，1.等。