genebridges K006说明书

Quick & Easy E.coli Gene Deletion Kit

快速简便的大肠杆菌基因删除试剂盒

用于快速敲除或修饰大肠杆菌染色体上的基因。

特征

• Red / ET的忠实重组
• 快速准确
• 可能有多个淘汰赛
• 方便地去除重组质粒

应用领域

• 该试剂盒旨在在不到一周的时间内敲除或改变大肠杆菌染色体上的基因

大肠杆菌染色体上基因的靶向破坏

1.转化用表达质粒pRedET转化将被修饰
的大肠杆菌菌株。

2. Red / ET重组
Red / ET表达是通过添加L-阿拉伯糖和温度变化来诱导的。含有50 bp同源臂的FRT-PGK-gb2-neo-FRT盒被转化。Red / ET介导的重组通过插入盒带破坏了靶基因座。

3.可选：去除选择标记
Flp介导的切除，仅留下一个FRT部位。（另请参见我们的FRT选择盒和Flp表达质粒和菌株）。

描述

Red / ET重组使碱基对可以准确，特异性和忠实的方式交换遗传信息。试剂盒随附有FRT侧翼的卡那霉素抗性标记盒，可用于替换大肠杆菌染色体上的基因。Red / ET重组可替代大肠杆菌染色体上长达30kb的片段。如果需要，使用FRT侧翼抗性盒替代靶基因可以随后通过FLP重组酶步骤去除选择标记。FLP表达质粒可以从Gene Bridges购买。通过重复插入试剂盒附带的功能盒或与Gene Bridges提供的其他功能盒组合，可以产生多个基因敲除。重组过程由于pRedET表达质粒的优化设计而受到严格控制。重组蛋白的基因在诱导型启动子的控制下，质粒带有温度敏感的复制起点，可在重组后方便地去除质粒。

内容

• 两个Red / ET重组蛋白表达质粒pRedET（tet）和pRedET（amp）。通过用这些质粒转化，可以使任何大肠杆菌菌株变成Red / ET熟练的。
• FRT位于卡那霉素抗性模板的侧面（FRT-PGK-gb2-neo-FRT），可用于您自己的实验。
• 替代大肠杆菌染色体上甘露糖转运蛋白（manX）基因的阳性对照。
• 详细的协议，质粒，图谱和序列的描述。

顺序

FRT-PGK-gb2-neo-FRT

AATTAACCCTCACTAAAGGGCGGCCGC GAAGTTCCTATTCTCTAGAAAGTATAGG AACTTC ATT CTACCGGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGC GCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCA CACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTT CGCGCCACCTTCCACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTC GCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGA TGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATA GCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGG GGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAG GCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTC CTCATCTCCGGGCCTTTCGACCTGCAGCAGCACGTGTTGACAATTAATCATCGGC ATAGTATATCGGCATAGTATAATACGACAAGGTGAGGAACTAAACCATGGGATCG GCCATTGAACAAGATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGC TATTCGGCTATGACTGGGCACAACAGACGATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTT CCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGT GCCCTGAATGAACTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGG GCGTTCCTTGCGCAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCT GCTATTGGGCGAAGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCC GAGAAAGTATCCATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGG CTACCTGCCCATTCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCG GATGGAAGCCGGTCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTC GCGCCAGCCGAACTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATC TCGTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCG CTTTTCTGGATTCATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGAC ATAGCGTTGGCTACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACC GCTTCCTCGTGCTTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTA TCGCCTTCTTGACGAGTTCTTCTGAGCGGGACTCTGGGGTTCGAATAAAGACCGA CCAAGCGACGTCTGA GAGCTCCCTGGCGAATTCGGTACCAATAAAAGAGCTTTAT TTTCATGATCTGTGTGTTGGTTTTTGTGTGCGGCGCG GAAGTTCCTATTCTCTAG AAAGTATAGGAACTTC CTCGAGCCCTATAGTGAGTCGTATTA

Gene Bridges拥有Red / ET重组的专有权利，并被允许颁发该技术的许可证并提供重组服务。任何其他学术或商业组织均无权提供重组服务。

与Red / ET重组可在任何选定位置克隆，亚克隆和修饰DNA。它可以改造任何大小的DNA分子，包括很大的分子，例如BAC或大肠杆菌染色体。

Red / ET重组增加了CRISPR / Cas9扩展基因组研究的能力。作为欧盟资助的项目AgedBrainSYSBIO的一部分，我们开发了一种新的策略来使大型基因组区域人性化。通过将CRISPR / Cas9与Red / ET重组相结合，我们成功地将一个33 kb的人类片段敲入了小鼠ApoE基因座。

4路重组（4WR）提供了一种新的快速且简化的方法，可在单个体内重组步骤中从多达四个DNA片段（例如PCR产物）组装质粒。4WR是Gene Bridges广受欢迎的直接克隆型大肠杆菌菌株GB05-dir（目录号K008）的新应用。

上海金畔现货genebridges K009说明书

E. coli strain GB08-red

大肠杆菌GB08-红色

描述

大肠杆菌菌株GB08-red使重组质粒和BAC成为可能，因为必需基因位于染色体上，因此无需在细胞中维持表达质粒。

特征

• 重组能力强的大肠杆菌菌株

• 在ybcC基因座上带有阿拉伯糖诱导型γβαA操纵子（红色γ，红色β，红色α和recA）的大肠杆菌菌株

应用

• 所有类型的“线性加环形”同源重组实验，例如质粒修饰

内容

• 具有重组能力的大肠杆菌 GB08-red的甘油库存

• 线性对照插入物（PGK-gb2-neo PCR产品）

• 环形对照质粒（含15kb小鼠Hoxa11基因的高拷贝质粒）

• 协议

国内代理商：

上海金畔

Gene Bridges拥有Red / ET重组的专有权利，并被允许颁发该技术的许可证并提供重组服务。任何其他学术或商业组织均无权提供重组服务。

与Red / ET重组可在任何选定位置克隆，亚克隆和修饰DNA。它可以改造任何大小的DNA分子，包括很大的分子，例如BAC或大肠杆菌染色体。

Red / ET重组增加了CRISPR / Cas9扩展基因组研究的能力。作为欧盟资助的项目AgedBrainSYSBIO的一部分，我们开发了一种新的策略来使大型基因组区域人性化。通过将CRISPR / Cas9与Red / ET重组相结合，我们成功地将一个33 kb的人类片段敲入了小鼠ApoE基因座。阅读我们  近发布的作品  以获取更多详细信息。

4路重组（4WR）提供了一种新的快速且简化的方法，可在单个体内重组步骤中从多达四个DNA片段（例如PCR产物）组装质粒。4WR是Gene Bridges广受欢迎的直接克隆型大肠杆菌菌株GB05-dir（目录号K008）的新应用。

上海金畔现货genebridges K003说明书

BAC Subcloning Kit

BAC亚克隆试剂盒

特征

• 无需限制位点

• 多可克隆20 kb的片段

• 高红色/ ET效率

• 重组后可方便地去除Red / ET重组蛋白表达质粒pRedET。

应用

• 将碱基对从BAC的DNA片段亚克隆到高拷贝质粒主链中

描述

可以包含大插入片段的大肠杆菌载体，例如细菌人工染色体（BAC），为功能基因组学提供了多个优势。它们可以携带足够的DNA，在单个分子中包含大多数真核基因，包括所有顺式作用调控元件，以及许多真核基因簇，原核调节子和许多完整的病毒基因组。然而，常规的克隆方法依赖于限制酶的使用和体外纯化步骤，这排除了大分子的工程改造。因此，直到近，这种分子的用途才受到限制。

BAC亚克隆试剂盒旨在通过Red / ET重组从任何类型的细菌人工染色体（BAC）有效地将高达20 kb的大DNA片段亚克隆到质粒载体中。

Red / ET重组（重组）是一种允许对任何大小的DNA分子进行工程改造的方法，包括非常大的分子，例如BAC或大肠杆菌染色体。它依赖于在体内同源重组的大肠杆菌，并允许范围广泛的具有DNA分子修饰在任何选定的位置上。

内容

• Red / ET重组蛋白表达质粒pRed / ET，通过此质粒转化，可将任何大肠杆菌菌株制成Red / ET精通

• 带有ColE1复制起点和氨苄青霉素抗性基因的线性载体将用于亚克隆实验

• 阳性对照，可将来自对照BAC的15 kb片段亚克隆到试剂盒随附的载体中

• 详细的协议，质粒，图谱和序列的描述

序列

ColE1小向量

放大器^R ColE1 ORI

GCTCTCCTGAGTAGGACAAATCCGCCGGGAGCGGATTTGAACGTTGCGAAGCAAC GGCCCGGAGGGTGGCGGGCAGGACGCCCGCCATAAACTGCCAGGCATCAAATTAA GCAGAAGGCCATCCTGACGGATGGCCTTTTTGCGTTTCTACAAACTCTTTTGTTT ATTTTTCTAATACATCAGAGAGATAGACATAGACATAGACATAGACATAGACATAGACATAGACATAGACATAGATAATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCG CCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAAC GCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATC GAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTT TTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGT TGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTG GTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAG AATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCT GACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGAT CATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACG ACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATT AACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAG GCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTA TTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACT GGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTA AGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTACG CGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGAC CGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTT CTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAG GGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGA TGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTG GAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTTGAACAACACTCAACC CTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTG GTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTA ACGTTTACAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACC AAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGA TCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAAC AAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACT CTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTC TAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATA CCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGT CTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCT GAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACT GAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAG GCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGC TTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTG ACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAAC GCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACA TGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGA GTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGC GAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTA TTTCACACCGCATAGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGAC GCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGT