proteintech KMI-2说明书
Mouse 单克隆抗体亚型鉴定试剂盒说明书
试剂盒组分
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Catalog No.
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KMI-2
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KMI-5
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酶标板(Microplate) 预包被了针对小鼠 IgG1，IgG2a，IgG2b，
IgG2c，IgG3，IgM，kappa light chain，lambda light chain 的特异性抗体
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2 块
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5 块
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封板膜(Plate Cover seals)
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2 张
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5 张
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20×PBST
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15 mL
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20mL×2
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100×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP (Goat Anti-Mouse IgM+IgG-HRP)
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120 μL
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300 μL
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显色液 (TMB Substrate) A 液
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240 μL
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600 μL
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显色液 (TMB Substrate) B 液
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24 mL
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30mL×2
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终止液 (Stop Solution)
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24 mL
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30mL×2
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储存条件
该试剂盒在低温下运输，收到后请置于 4°C 保存，保存时间 6 个月。
操作步骤
1. 材料准备
从 4°C 中取出 Mouse 单克隆抗体亚型鉴定试剂盒，室温条件下平衡 30 分钟。
a. 1×PBST 10 mL 20×PBST + 190 mL 超纯水
b. 酶标板条 根据样本数量选取酶标板条数（测定 1 个样本需要 1 条酶标板条），余下板条置于密封袋中，4°C 保存。
c. 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP 10 μL 100×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP + 990 μL 1×PBST
2. 样本准备
a. 杂交瘤细胞上清 将样本以 1×PBST 1:100 稀释，例如 10 μL 杂交瘤细胞上清 + 990 μL 1×PBST。推荐稀释范围为 1:20-1:200。
b. 腹水 将样本以 1×PBST 1:100000 稀释，例如 1 μL 腹水 + 1 mL 1×PBST（1:1000），再取上述混合液 5 μL + 495 μL 1×PBST。推荐稀释范围为 1:50000-1:200000。
c. 纯化抗体 将样本以 1×PBST 稀释至 200 ng/mL，推荐稀释浓度为 20 ng/mL-1 μg/mL。
3. 单克隆抗体亚型鉴定
a. 将待测样本适当稀释加入板条样品孔中，50 μL/孔。
a. 无需孵育，将 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP 加入样品孔中，50 μL/孔。混匀器上轻轻混匀，也可用手轻轻敲击板架两侧 1 min。
b. 盖上封板膜，室温孵育 1 h。
c. 弃去孔内液体，1×PBST 洗板 3 次，吸水纸上拍干。
d. 将现配的显色液加入孔中，100 μL/孔。
注：显色液配方，A 液：B 液=1:100，即 10μL A 液与 1 mL B 液混合，混匀后立即使用。
e. 室温避光显色 10-20 min。每孔加入终止液，100 μL/孔。
f.
结果判读。结果可以对照下图以肉眼判定，也可以通过酶标仪读取OD450。颜色深或是 OD 值高孔对应的即为相应亚型。注：每个样本应该在A-F 中有一个阳性孔（即是样本重链类型），G 和 H 中有一个阳性孔（即是样本轻链类型）。
注意事项
1. 显色液应临用前配制，即配即用。显色液A 液应避光保存。
2. 余下板条应密封保存。如短期不用，可置于-20°C 保存。
常见问题与解决方案
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常见问题
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可能原因
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解决方案
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多种重链结果
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腹水中有杂抗体
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将腹水样本至少 1:100000 稀释
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样本中抗体浓度过高
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再将样本 1:2-1:10 稀释
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杂交瘤细胞中含有多种细胞系
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亚克隆杂交瘤细胞
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显色较慢或颜色较弱
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样本中抗体浓度低
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减少稀释倍数；延长显色时间
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结果难以判定
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多种重链或轻链结果
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再将样本 1:4 或 1:8 稀释后重新检测
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