Wakopak Navi 系列 反相 HPLC 用填充柱

Wakopak Navi 系列 反相 HPLC 用填充柱

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Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱 Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱


  Wakopak Navi 系列是由三种带有不同烷基链产品组成的反相 HPLC 用填充柱。分别以 C18、C22 和 C30 基修饰粒径5um 的高纯球形硅胶并在实施封端处理后将其制成填充剂填充成高效柱。以 C22 和 C30 基修饰的填充剂能分析 ODS(C18 基)无法分离的样品,扩展了分析范围。



功能基团

填充材料名称

平均粒径(μm)

硅胶形状

平均孔径 (nm)

比表面积(m2/g)

孔体积(mL/g)

C%

ODS(C18)

NaviC18-5

5

全多孔球形

12

300

1.0

19

C22

NaviC22-5

5

全多孔球形

12

400

1.2

20

C30

NaviC30-5

5

全多孔球形

12

300

1.0

23



每种柱子的选择指南 


● Wakopak Navi C18-5
 常规分析用,改良修饰法和封端处理后制得的 ODS 柱升级产品 ;
● Wakopak Navi C22-5
 能在高含水流动相实现高分离、强保留;
● Wakopak Navi C30-5
 聚合型,用于相似结构化合物的分离,同分异构体的分离。



保留能力


 

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

色谱柱:4.6 mm×250 mm

洗脱剂:CH3CN/H2O=60/40(v/v)

流   速:1.0 mL/min. at 35℃

检测器:UV 254 mm 0.16 AUFS

样品:1)尿嘧啶(7.75 μg/mL)
        2)苯(1.45 μL/mL)
        3)萘(0.2 mg/mL)
进样量:6 μL



◆Wakopak  Navi C18-5


  经 C18 精细化处理,填料完全封尾。该填料可广泛用于碱性、酸性和配位化合物。

 

分析碱性化合物

分析 8- 羟基喹啉酮

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

 

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

色谱柱:Wakopak® Navi C18-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相:乙腈/10 mM 磷酸二氢钾(pH 7.0)

    =30/7(0 v/v)

流速:35℃,1.0 mL/min 

检测器:UV 254 nm   0.16 AUFS

进样量:10 μL

 

色谱柱:Wakopak® Navi C18-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相:乙腈/50 mM磷酸二氢钾(pH3.5),
    0.1% EDTA・2Na=60/40(v/v)

流速:1.0 mL/min,35℃

检测器:UV 240 nm 0.64  AUFS

进样量:5 μL

 


Wakopak  Navi C22-5

  用 C22 修饰后封尾制成的色谱柱,能在高水分含量的流动相下使用,产物的纯度和保留特性均高于 C18。


分离儿茶酚胺

分离线性羧酸类物质

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

 

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

色谱柱: Wakopak® Navi C22-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相: 50 mM NaH2PO4(pH 2.4)

流速: 40℃,1.0 mL/min

检测器: UV 235 nm 0.04 AUFS

进样量:5 μL

 

色谱柱: Wakopak® Navi C22-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相: 20 mM NaH2PO4 (pH 2.5)

流速: 35℃,1.0 mL/min 

检测器: UV 210 nm 0.04 AUFS

进样量:10 μL

 


Wakopak  Navi C30-5

  填料经三十烷基(C30)聚合物修饰后再进行封尾。C30 表现出很好的结构识别能力。

  

分析类胡萝卜素       

分析维生素E

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

 

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

色谱柱:Wakopak® Navi C30-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相:乙腈/甲醇/三氯甲烷=75/10/15(v/v/v)

流速:35℃,2.0 mL/min 

检测器: UV 470 nm  0.16 AUFS

进样量:5 μL

 

 色谱柱:Wakopak® Navi  C30-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相:乙腈(100%)

流速:1.0 mL/min,35℃

检测器:UV 295 nm  0.064 AUFS

进样量:10 μL

 

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
233-60353 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
234-60361 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
230-60363 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
231-60393 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
234-60403 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
231-60511 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
237-60513 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
235-60531 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
231-60533 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
232-60703 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
230-60743 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
237-60851 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
233-60853 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
231-60871 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
237-60873 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
232-61043 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
233-61073 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
234-61081 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
230-61083 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
237-61191 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
233-61193 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
237-61211 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
233-61213 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)

Wakopak® Wakosil 5NH2(氨基柱)

Wakopak® Wakosil 5NH2(氨基柱)

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Wakopak® Wakosil 5NH2(氨基柱)Wakopak® Wakosil 5NH2(氨基柱)



  硅胶粒径为 5 μm,孔径 12 nm,与氨丙基进行化学键合。通过改变流动相,该填料可用于正相或反相吸附。特别地,该填料对分析单糖、双糖和核苷酸很有帮助。

 

功能基团

填充材料名称

平均粒径(μm)

硅胶形状

平均孔径(nm)

比表面积(m2/g)

孔体积(mL/g)

NH2

(氨丙基)

Wakosil 5NH2

5

全多孔球形

12

300

1.0

  

蔗糖分析 

Wakopak® Wakosil 5NH2(氨基柱)

色谱柱:Wakopak® Wakosil   5NH2 

     (4.6 mm ×150 mm)       

流动相:CH3CN/H2O=75/25  (v/v)      

 流  速:1.0 mL/min,35℃      

检测器:Rl × 32, FS 10 mV, ATTEN=1      

进样量:10 μL

 

寡糖分析

Wakopak® Wakosil 5NH2(氨基柱)

 色谱柱:Wakopak® Wakosil 5NH2 

              (4.6 mm×150 mm)      

流动相:CH3CN/H2O=70/30  (v/v)       

流   速:2.0 mL/min.       

检测器:Rl

 

 

 

分析橙汁中的抗坏血酸

Wakopak® Wakosil 5NH2(氨基柱)

色谱柱:Wakopak®  Wakosil 5NH2 

    (4.6 mm×250 mm)      

 流动相:乙腈/0.01M 磷酸二氢钾

     =80/20 (v/v)       

流   速:1.2 mL/min.      

检测器:UV 254 nm

分析核苷酸磷酸

Wakopak® Wakosil 5NH2(氨基柱)

色谱柱:Wakopak®  Wakosil 5NH2 

    (4.6 mm×250 mm)       

流动相:乙醇/0.1M磷酸二氢钾=10/90 (v/v)   

流   速:1.0 mL/min.       

检测器:UV 254 nm

 

 

 

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
234-63323 Wakopak Wakosil 5NH2 3.0*150mm 
氨丙基硅胶柱
1 Column(W)
231-63333 Wakopak Wakosil 5NH2 3.0*250mm 
氨丙基硅胶柱
1 Column(W)
231-57603 Wakopak Wakosil5NH2 4.0*150mm 
氨丙基硅胶柱
1 Column(W)
235-57623 Wakopak Wakosil5NH2 4.0*250mm 
氨丙基硅胶柱
1 Column(W)

利用 Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量 检测氨基酸饮料的氨基酸

利用 Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量 检测氨基酸饮料的氨基酸

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利用 Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量  检测氨基酸饮料的氨基酸利用 Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量

检测氨基酸饮料的氨基酸

和光纯药工业株式会社 试剂化学实验室 須藤 勇紀

◆前言


  自从天冬酰胺在1806年从芦笋汁中分离成功以来,人们开始发现氨基酸,并将其大致分为四类,即作为营养物质的利用,作为味道成分的利用,生理作用的利用,反应性的利用,这些功能在我们生活中是不可缺少的 1)。另外,在动物体内无法合成的氨基酸既是动物的必需氨基酸,也是很重要的食物营养素。

  在日本实施的1991年特定保健食品体系、2002年保健功能食品体系、2015年功能性食品体系过程中,也是期待着将氨基酸作为保健品用于国民自我治疗药物的实践中 2,3)。功能性标示食品制度因其呈报制度更便于新企业参与。2017年3月特定保健用食品的数量为 1,127 件,功能性标示食品从以往的 815 件正在急剧增加中。从而可预计保健食品市场将迅速扩大。氨基酸作为营养素的功能已被广泛认可,以饮料、健康饮料、果冻等多种形态的氨基酸的食品流通于市场中 1),未来也将继续推出更多含有氨基酸的新型食品。



◆3-氨基吡啶-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(APDS)衍生化


  高效液相色谱法(HPLC)中的氨基酸分析衍生化技术是很久以前便存在的,因此市面上也存在许多种类的衍生剂,其中包括茚三酮和邻苯二甲醛。本次介绍的 APDS 氨基酸衍生化技术是一种具有高疏水性,且因其高电离效率更有利于反相 LC/MS(/MS)的方法。

  该方法不仅用于味之素株式会社的“Amino index® 癌症风险筛选”(AICS)7)。在食品分析中也用于氨基酸分析专用装备(UF-Amino Station)的分析案例 8)

  Wakopak® Ultra APDSTAG® 是一种专用分析柱,可利用 LC / MS / MS 仪器对 APDS-氨基酸衍生物进行分离分析。本次我们介绍的是使用该柱分析市售氨基酸饮料中的氨基酸种类。

利用 Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量  检测氨基酸饮料的氨基酸

◆实验方法和结果分析


  样品前处理和衍生化的流程如图1所示,LC / MS / MS条件如表1所示。 定量采用内标法进行。在这次实验的饮料中,据材料记载氨基酸种类含有甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)和精氨酸(Arg)这六种种类,但市售饮料中都不含表1的 No.13~20 的氨基酸类。图2显示的是市售饮料中的6种氨基酸的 MRM 色谱分析图。接下来,将氨基酸标准品加入到获得该色谱的样品中,并进行回收实验。图3显示的是添加标准品后饮料的 MRM 色谱图,而图4则是加标回收实验的结果显示图。回收率高达 99-103%。

  根据这次研究的结果显示,使用 Wakopak® Ultra APDS TAG® 进行 APDS 衍生化的氨基酸定量检测是有效的。虽然这次推出的结果仅限于饮料,但对于分析其他食品和培养液等样品也是有用的,欢迎采购此产品用于定量分析氨基酸。


表1.LC/MS/MS 条件

设备

Prominence LC-20A XR(岛津公司)

Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1×100 mm(W)

防护过滤器

SunShell RP 防护过滤器(Cromanic   Technologies)

流动相 A

APDS TAG® 洗脱液

流动相 B

60%乙腈

梯度条件

0 min.(A:B=94:6)→0.05 min.(92:8)

→1.70 min.(92:8)   →1.71 min.(88:12)→4.95 min.(70:30)→5.95  min.(40:60)→5.96 min.(5:95)→6.70 min.(5:95)

→6.71 min.(94:6)→12 min.(94:6)

流量

0.3 mL/min.

柱温

40 ℃

注射量

1 μL

 

设备

LCMS-8030 Plus(岛津公司)

电离

ESI positive

测量模式

MRM

DL 温度

250 ℃

雾化器气体流量

1.5 L/min.

加热块温度

250 ℃

干燥气体流量

10 L/min.

 

No.

组件名称(简称)

分子量

监测因子(m/z)

前体

制品

1

甘氨酸(Gly)

75.1

196.1

121.0

2

甘氨酸-13C2,15N(Gly-IS)

78.1

199.1

121.1

3

丙氨酸(Ala)

89.1

210.1

121.0

4

丙氨酸-13C3(Ala-IS)

92.1

213.1

121.1

5

缬氨酸(Val)

117.2

238.1

121.0

6

缬氨酸-13C5,   15N(Val-IS)

123.1

244.1

121.1

7

亮氨酸(Leu)

131.2

252.1

121.0

8

异亮氨酸(Ile)

131.2

252.1

121.0

9

亮氨酸-5,5,5-d3(Leu-IS)

134.2

255.1

121.1

10

异亮氨酸-13C6,15N(Ile-IS)

138.1

259.1

121.1

11

精氨酸(精氨酸)

174.2

295.1

175.1

12

精氨酸-15N4(Arg-IS)

178.2

299.1

179.1

13

肌氨酸(Sar)

89.1

210.0

121.0

14

羟脯氨酸(Hypro)

131.1

252.1

121.0

15

天冬酰胺(Asn)

132.1

253.1

121.0

16

天冬氨酸(Asp)

133.1

254.1

121.0

17

谷氨酰胺(Gln)

146.1

267.1

121.0

18

谷氨酸(Glu)

147.1

268.1

121.0

19

α-氨基己二酸(α-AAA)

161.2

282.1

121.0

20

瓜氨酸(Cit)

175.2

296.3

121.0

 

利用 Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量  检测氨基酸饮料的氨基酸

图2. 市售饮料中6种氨基酸成分的 MRM 色谱图

 

利用 Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量  检测氨基酸饮料的氨基酸

图3添加标准品后饮料的 MRM 色谱图


利用 Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量  检测氨基酸饮料的氨基酸

图4加标回收实验的结果显示图


<致谢>感谢味之素股份有限公司的每一位同仁对本产品的合作。

 Wako Pack® Ultra APDS Tag® 通用 LC / MS 可以实现高灵敏度和高速氨基酸分析。

◆产品列表


产品编号

产品名称

包装

235-63973

Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1mm × 100mm( W)

1支

 


◆相关产品


产品编号

产品名称

标准/制造商

规格

014-23841

Amino Acid Analysis Reagent (for LC/MS) (AminoTag(R))

氨基酸分析试剂

(用于LC/MS)

用于氨基酸自动分析

100 mg

016-28161

Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN (High Range)

氨基酸混合标准溶液, AN型(高浓度)

用于氨基酸自动分析 1 mL×5A,5 mL

010-28164

012-28141

Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B (High Range)

氨基酸混合标准溶液, B型(高浓度)

用于氨基酸自动分析 1 mL×5A,5 mL

016-28144

019-28151

Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H (High Range)

氨基酸混合标准溶液, H型(高浓度)

用于氨基酸自动分析 1 mL×5A,5 mL

013-28154

293-73701

APDS TAG® Wako Amino Acids Internal   Standard Mixture Solution

用于氨基酸自动分析

1套

010-23061

APDS Tag Wako Eluent

APDS标签洗提液

用于氨基酸自动分析

1 L

019-23151

APDS Tag Wako Borate Buffer

APDS标签硼酸盐缓冲液

用于氨基酸自动分析

1 L

 


参考文献


[1] 味の素株式会社 編:「アミノ酸ハンドブック」 (工業調査会)(2003).

[2] 大澤 俊彦:化学と生物,44 (6),406 (2006).

[3] 和田 他:分析化学,65 (6),301 (2016).

[4] 湯田 直樹:健康・栄養食品研究,16 (1),1 (2017).

[5] 特許第 4453363 号.

[6] 宮野 博:和光純薬時報,79 (1),2 (2011).

[7] 今泉 明:化学と生物,53 (3),192 (2015).

[8] 渡邊 他:島津評論,69 (1・2),47 (2012).